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    재조합 단백질 생산 CHO 세포용 무혈청 배지 개발

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    태아 소 혈청(FBS)는 동물세포 배양에서 필수적인 보충제로 사용되어 왔다. 그러나 혈청 함유 배지는 성분이 불분명하고 재현성이 떨어지며 오염에 대해 취약한 몇 가지 단점이 있다. 최근에는 균일한 성분과 뛰어난 안정성, 재현성 등으로 무혈청 배지가 각광받고 있다. 본 연구에서는 Design of experiments (DoE)를 사용하여 재조합Chinese hamster ovary (CHO) 세포를 위한 무 혈청 배지를 개발했다. Plackett-burman design 를 사용하여 유의한 요인을 선택하고 fractional factorial design 를 사용하여 유의한 요인들에 대한 교호작용을 확인 하였다. 세포가 peak viable cell density(PVCD)를 보이는 4일차에 세포농도를 확인 하였다. Fractional factorial design 결과, 29x〖10〗^5 cells/ml 가 나왔다. rCHO 세포의 성장을 더 촉진하기 위하여, 주요인자 3개를 선별 한 후, central composite design을 통하여 최적화를 진행하였다. 최종적으로 본 실험에서는 PBD 결과 값에 비하여 peak viable cell density 가 148% 향상된 결과를 얻으며 무 혈청 배지 개발을 하였다.
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    태아 소 혈청(FBS)는 동물세포 배양에서 필수적인 보충제로 사용되어 왔다. 그러나 혈청 함유 배지는 성분이 불분명하고 재현성이 떨어지며 오염에 대해 취약한 몇 가지 단점이 있다. 최근에...

    태아 소 혈청(FBS)는 동물세포 배양에서 필수적인 보충제로 사용되어 왔다. 그러나 혈청 함유 배지는 성분이 불분명하고 재현성이 떨어지며 오염에 대해 취약한 몇 가지 단점이 있다. 최근에는 균일한 성분과 뛰어난 안정성, 재현성 등으로 무혈청 배지가 각광받고 있다. 본 연구에서는 Design of experiments (DoE)를 사용하여 재조합Chinese hamster ovary (CHO) 세포를 위한 무 혈청 배지를 개발했다. Plackett-burman design 를 사용하여 유의한 요인을 선택하고 fractional factorial design 를 사용하여 유의한 요인들에 대한 교호작용을 확인 하였다. 세포가 peak viable cell density(PVCD)를 보이는 4일차에 세포농도를 확인 하였다. Fractional factorial design 결과, 29x〖10〗^5 cells/ml 가 나왔다. rCHO 세포의 성장을 더 촉진하기 위하여, 주요인자 3개를 선별 한 후, central composite design을 통하여 최적화를 진행하였다. 최종적으로 본 실험에서는 PBD 결과 값에 비하여 peak viable cell density 가 148% 향상된 결과를 얻으며 무 혈청 배지 개발을 하였다.

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    다국어 초록 (Multilingual Abstract) kakao i 다국어 번역

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    Fetal bovine serum (FBS) has been used as an essential supplement in mammalian cell cultures. However, serum-containing media have some disadvantages such as unclear composition, poor reproducibility and high risk of microbial contaminations. Recently, serum-free media has gained attention due to its uniform ingredients, excellent stability, and reproducibility. In this study, we developed serum-free media for recombinant Chinese Hamster Ovary (CHO) cells using design of experiments (DoE). Significant factors were selected using plackett-burman design, and the fractional factorial design was used to examine interactive effects of adopted components. In the optimal condition, the rCHO cells successfully showed peak viable cell density up to 29x105 cells/mL on fourth day. To promote rCHO cell growth, three main factors were selected and optimized through central composite design. Finally, in this experiment, peak viable cell density was improved by 148% compared to PBD results, and serum-free medium was developed.
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    Fetal bovine serum (FBS) has been used as an essential supplement in mammalian cell cultures. However, serum-containing media have some disadvantages such as unclear composition, poor reproducibility and high risk of microbial contaminations. Recently...

    Fetal bovine serum (FBS) has been used as an essential supplement in mammalian cell cultures. However, serum-containing media have some disadvantages such as unclear composition, poor reproducibility and high risk of microbial contaminations. Recently, serum-free media has gained attention due to its uniform ingredients, excellent stability, and reproducibility. In this study, we developed serum-free media for recombinant Chinese Hamster Ovary (CHO) cells using design of experiments (DoE). Significant factors were selected using plackett-burman design, and the fractional factorial design was used to examine interactive effects of adopted components. In the optimal condition, the rCHO cells successfully showed peak viable cell density up to 29x105 cells/mL on fourth day. To promote rCHO cell growth, three main factors were selected and optimized through central composite design. Finally, in this experiment, peak viable cell density was improved by 148% compared to PBD results, and serum-free medium was developed.

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    목차 (Table of Contents)

    • 1 서론 1
    • 1.1 동물세포배양 1
    • 1.1.1 Chinese hamster ovary (CHO) cell 1
    • 1.2 동물세포 배양배지 4
    • 1.2.1 동물세포배양배지 종류 4
    • 1 서론 1
    • 1.1 동물세포배양 1
    • 1.1.1 Chinese hamster ovary (CHO) cell 1
    • 1.2 동물세포 배양배지 4
    • 1.2.1 동물세포배양배지 종류 4
    • 1.2.2 무 혈청배지 구성요소 6
    • 1.3 Design of experiments (DoE) 13
    • 1.3.1 Plackett-burman design 15
    • 1.3.2 Fractional factorial design 16
    • 1.3.3 Central composite design 18
    • 2. 연구 목적 20 
    • 3. 재료 및 방법 22
    • 3.1 세포배양 22
    • 3.2 배지제조 23
    • 3.3 Viable cell density, cell viability 측정 26
    • 3.4 Design of experiments (DoE) 26
    • 3.4.1 Plackett-burman design 28
    • 3.4.2 Fractional factorial design 30
    • 3.4.3 Central composite design 31
    • 4. 결과 32
    • 4.1 ICP-MS analysis 32
    • 4.2 Amino acid analysis 32
    • 4.3 Plackett-burman design 36
    • 4.4 Fractional factorial design 40
    • 4.5 Central composite design 43
    • 5. 결론 46
    • 6. 참고문헌 49
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