방풍의 11가지 생리활성성분의 동시분석 : HPLC-DAD 및 LC-MS/MS|RISS 상세보기

국문 초록 (Abstract)

Saposhnikovia divaricata Schiskin의 뿌리인 방풍의 11가지 생리활성성분 (1) prim-O-glucosylcimifugin, (2) cimifugin, (3) nodakenin, (4) 4'-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol, (5) sec-O-glucosylhamaudol, (6) psoralen, (7) bergapten, (8) imperatorin, (9) phellopterin, (10) 3'-O-angeloylhamaudol 그리고 (11) anomalin을 대상으로 신속하고 감도 좋은 HPLC-DAD 분석법과 LC-MS/MS 분석법을 확립하였다. HPLC-DAD 분석법에서는 Ascentis Express C18 (4.6 × 100 mm, 2.7 μm particle size) fused-core 칼럼을 사용하였다. 이동상으로는 A용매를 아세토니트릴/물 (10/90, v/v)과 B용매를 아세토니트릴/물 (90/10, v/v)을 기울기 용리 하였으며, 파장 300 nm에서 유속을 1.0 mL/min으로 유지시켰다. HPLC-DAD 방법은 11가지 방풍 생리활성성분을 방풍의 50% 메탄올 추출물 내의 다른 성분에 대하여 간섭을 받지 않고 모두 분리할 수 있었다. HPLC-DAD 분석법에 대하여 검증한 결과, 직선성, 정확성, 정밀성 (일내- 그리고 일간 검증), 정량한계, 완건성 그리도 회수율이 양호하였다. 전기 분무 이온화와 함께 삼중 사중극자 질량분석기로 특정한 11가지 성분의 확인이 가능하였다. LC-MS/MS 분석법에 대하여 검증한 결과, 직선성, 정확성 그리고 정밀성이 양호하였다.
또한, 방풍의 추출방법 최적화를 통해, 방풍이 최대로 추출되는 조건을 확립하였다. 11가지 생리활성성분을 확립된 분석법을 적용하여 기원을 감별 받은 방풍 80종을 분석하였으며 주성분 분석과 군집 분석을 수행하여 80종의 방풍 시료의 패턴을 확인할 수 있었다. HPLC-DAD와 LC-MS/MS 분석법을 통하여 방풍 생리활성성분을 정량하여 방풍의 품질 평가의 기준을 제시하는데 사용될 수 있을 것으로 기대된다.

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다국어 초록 (Multilingual Abstract)

A rapid and sensitive analytical HPLC-DAD and LC-MS/MS methods for the simultaneous determination of eleven bioactive components from roots of Saposhnikovia divaricata Schiskin, (1) prim-O-glucosylcimifugin, (2) cimifugin, (3) nodakenin, (4) 4'-O-β-D-glucosyl-5-O-methyl visamminol, (5) sec-O-glucosylhamaudol, (6) psoralen, (7) bergapten, (8) imperatorin, (9) phellopterin, (10) 3'-O-angeloylhamaudol and (11) anomalin were developed and validated. The separation condition for HPLC-DAD was optimized using an Ascentis Express C18 (4.6 × 100 mm, 2.7 μm particle size) fused-core column. The mobile phase was composed of (A) acetonitrile/water (10/90, v/v) and (B) acetonitrile/water (90/10, v/v)at a flow rate of 1.0 mL/min and a detector was set at 300 nm. HPLC-DAD method was successful to give the base line separation of eleven components and no interfering peaks detected in the 50% methanol extract of Saposhnikoviae Radix. The HPLC-DAD method was validated in terms of linearity, accuracy and precision (intra- and inter-day validation), limit of quantification (LOQ), robustness and recovery. Specific determination of eleven components was also accomplished by a triple quadrupole tandem mass spectrometer equipped with an electrospray ionization source (ESI). The LC-MS/MS method was fully validated for the linearity, accuracy and precision. In addition, optimal extraction conditions of Saposhnikoviae Radix were established. This analytical method was applied to determine eleven bioactive components in 80 Saposhnikoviae Radix samples and principal components analysis (PCA) and cluster analysis were performed to differentiate the 80 samples based on the contents of the characteristic constituents. These HPLC-DAD and LC-MS/MS methods will be very valuable for commercial quality control of Saposhnikoviae Radix and its pharmaceutical preparation.

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목차 (Table of Contents)

Ⅰ. 서론 1
Ⅱ. 실험재료 및 방법 7
1. 시약 및 기기 7
2. 표준액 조제 11
2.1. Stock standard solution의 제조 11

Ⅰ. 서론 1
Ⅱ. 실험재료 및 방법 7
1. 시약 및 기기 7
2. 표준액 조제 11
2.1. Stock standard solution의 제조 11
2.2. HPLC-DAD working standard solution의 제조 11
2.3. LC-MS/MS working standard solution의 제조 12
3. 방풍 생리활성성분의 HPLC-DAD 분석법 개발 13
3.1. 최적 파장의 선택 13
3.2. 칼럼의 선택 13
3.3. 이동상의 선택 13
3.4. 칼럼 온도의 선택 13
4. 방풍 생리활성성분의 LC-MS/MS 분석법 개발 14
5. 분석법의 검증 (Validation) 15
5.1. 선택성 15
5.2. 직선성 15
5.3. 정밀성 및 정확성, 정량한계 15
5.4. 회수율 16
5.5. 완건성 16
6. 방풍의 추출법 최적화 17
6.1. 추출방법 17
6.2. 추출용매 17
6.3. 추출용매의 조성 17
6.4. 추출시간 17
7. 시료 중 함량 분석 및 패턴 분석 17
7.1. 함량 분석 17
7.2. 패턴 분석 18
Ⅲ. 결과 및 고찰 19
1. 방풍 생리활성성분의 HPLC-DAD 분석법 개발 19
1.1. HPLC-DAD 분석 조건 19
1.1.1. 최적 파장의 선택 19
1.1.2. 칼럼의 선택 22
1.1.3. 이동상의 선택 25
1.1.4. 칼럼 온도의 선택 27
1.2. HPLC-DAD 분석법의 검증 (Validation) 30
1.2.1. 선택성 30
1.2.2. 직선성 32
1.2.3. 정밀성 및 정확성, 정량한계 35
1.2.4. 회수율 37
1.2.5. 완건성 39
2. 방풍 생리활성성분의 LC-MS/MS 분석법 개발 44
2.1. LC-MS/MS 분석 조건 44
2.2. LC-MS/MS 분석법의 검증 (Validation) 53
2.2.1. 선택성 53
2.2.2. 직선성 55
2.2.3. 정밀성 및 정확성, 정량한계 58
3. 방풍의 추출법 최적화 60
3.1. 추출방법 60
3.2. 추출용매 61
3.3. 추출용매의 조성 62
3.4. 추출시간 63
4. 시료 중 함량 분석 및 패턴 분석 64
4.1. 함량 분석 64
4.2. 패턴 분석 73
Ⅳ. 결론 77
Ⅴ. 참고문헌 78
Ⅵ. 국문초록 82
Ⅶ. Abstract 84

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