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병원성 파울러자유아메바에서 클로닝된 Nfa1 단백질에 대한 단클론항체의 생산과 특성
병원성 파울러자유아메바에서 클로닝된 Nfa1 단백질에 대한 단클론항체의 생산과 특성 목적: 자유생활아메바는 담수와 토양에서 자유생활을 하는 아메바로서 자연 환경에서는 세균들을 포식하며, 자유아메바 (genus Naegleria) 중 파울러자유아메바 (Naegleria fowleri)는 사람, 마우스 및 다른 실험동물들에서 원발성 아메바성 뇌수막염 (primary amoebic meningoencephalitis; PAME)을 유발하는 것으로 알려져 있다. 본 연구자의 연구실에서는 파울러자유아메바의 cDNA library를 구축하여 파울러자유아메바에 대한 감염혈청 및 면역혈청으로 immunoscreening과정을 통해 항원성과 관련이 있고, 특히 위족 (pseudopodia)에 특이성이 있는 유전자를 클로닝하여 nfa1 (Naegleria fowleri antigen 1)이라 명명하였다. 본 연구의 목적은 병원성 파울러 자유아메바에서 클로닝된 Nfa1 단백질에 대한 단클론항체를 생산하고 그 특성을 검정하고자 하였다. 재료 및 방법: 파울러자유아메바에서 클로닝된 nfa1 유전자로부터 재조합 His-tag fusion Nfa1 단백질을 얻은 다음, 정제하여 생후 6주 된 BALB/c 마우스 암컷에 면역시키고, 마우스의 비장을 적출하여 형질 세포종 (myeloma) 세포주인 F0 세포와 세포융합기술을 이용하여 세포융합을 실행하였다. 재조합His-tag fusion Nfa1 단백질에 대한 단클론항체를 생산하는지를 확인하기 위하여 면역효소흡착법 (ELISA)으로 항원과의 반응 정도를 측정하여, 항체를 분비하는 잡종세포를 선택 배양하였으며, 한계 희석법 (limiting dilution method)을 통하여 단클론항체를 얻을 수 있었다. 결과: 8개의 단클론항체 즉, A1F, A3C, A6D, A10F, C3A, C6F, C7F, B6B를 얻었다. 항원에 대한 항체의 반응을 확인하기 위해 western blotting을 수행하여 반응대를 확인한 결과, 단클론항체 8개 (A1F, A3C, A6D, A10F, C3A, C6F, C7F, B6B)가 17 kDa 크기의 재조합 His-tag fusion Nfa1 단백질과 강하게 반응 하였다. 각각 항체의 종류를 조사하기 위해 isotyping을 실행한 결과, 단클론항체 8개 (A1F, A3C, A6D, A10F, C3A, C6F, C7F, B6B)가 모두 IgG2b였다. 또한, 형광현미경을 통하여 각각의 단클론항체 모두가 아메바의 위족 (pseudopodia)과 food-cups에서 특이성이 나타남에 따라 Nfa1 단백질의 위치를 확인할 수 있었다. 결론: Nfa1 단백질에 대한 8개의 단클론항체를 분비하는 세포주들을 얻을 수 있었으며, 단클론항체를 사용하여 파울러자유아메바의 위족과 food-cups에서 Nfa1 단백질의 위치를 특이적으로 관찰할 수 있었다. 따라서, 본 연구 결과에서 얻어진 Nfa1 단백질에 대한 단클론항체가 앞으로 N. fowleri의 다양한 면역학적 연구에 유용하게 사용될 것으로 기대된다. OBJECTIVE: In order to use in the immunopathological studies of pathogenic Naegleria fowleri, monoclonal antibodies against a recombinant His-tag fusion Nfa1 protein cloned from pathogenic N. fowleri were produced, and its characterization was elucidated. In addition, to observe the usage in immunological studies, the localization of the Nfa1 protein in N. fowleri was observed by immunofluorescent assay using monoclonal antibodies. METHODS: Six-week-old female BALB/c mice were immunized with a purified recombinant His-tag fusion Nfa1 protein. Cell lines producing McAbs against the recombinant His-tag fusion Nfa1 protein were produced according to the protocol of hybridoma technique using myeloma cells (F0 cell). The McAbs were characterized by isotyping and Western blot analysis. RESULTS: Eight McAbs (A1F, A3C, A6D, A10F, C3A, C6F, C7F, B6B) against the rNfa1 protein were obtained. Eight McAbs isotypes were all IgG2b. The McAbs had high affinity against the recombinant His-tag fusion Nfa1 protein, which was resulted by indirect ELISA. They recognize 17 kDa protein which was defined with the recombinant His-tag fusion Nfa1 protein by Western blot analysis. Also, The Nfa1 protein reacted with eight McAbs showed on pseudopodia and food-cups by a fluorescent microscope. CONCLUSION: Eight hybridoma cell lines (A1F, A3C, A6D, A10F, C3A, C6F, C7F, B6B) secreting high titer of McAbs against the recombinant His-tag fusion Nfa1 protein were established. Also, the localization of the Nfa1 protein reacted with eight McAbs was observed on pseudopodia and food-cups of N. fowleri trophozoites by a fluorescent microscope. Therefore, the anti-Nfa1 monoclonal McAbs will be efficiently used in immunological study of PAME by N. fowleri.
이 논문은, 학습자가 내적 편견으로부터 자유를 누려야 한다는 생각으로 교육을 하고 있음에도 불구하고 지나친 훈육과 강제적인 제도에 의해 오히려 자유에서 멀어지게 되는 상황에 대해 문제를 제기한 것이다. 자유를 추구한다는 목적을 가진 교육이, 어째서 자유를 구속하게 되는가. 여기에서 ‘자유’라는 동일한 단어가 그 쓰임에 있어서는 다른 의미를 내포하고 있음을 알 수 있다. 자유는 일반적으로 소극적 자유와 적극적 자유의 두 가지 의미로 구분하여 논의되어 왔다. 본 고에서는 교육적 관점에서 논의하기 위해 학습하는 과정에서 누려야 할 자유를 ‘과정에서의 자유’로, 학습한 결과로 누리게 될 자유를 ‘결과로서의 자유’라고 칭하였다. 교육관 중에서도 자유에 특히 중점을 두어 전개된 것이 있다. 자유교육관과 인간주의 교육관이 대표적인데 전자는 결과로서의 자유를, 후자는 과정으로서의 자유를 추구하는 교육관이다. 수학교육의 관점에서는 두 교육관 모두 수학을 결과로서의 자유를 지향하는 교과로 생각하나 인간주의 교육관에서 과정으로서의 자유를 좀더 고려해 왔다. 이러한 시사점을 적용하기 위해 수학교육의 내용과 방법, 수업의 실제로 나누어 논의한다. 수학의 구조를 체득함으로써 결과로서의 자유를 경험하게 된다. 따라서 역사 속에서 자유의 의미와 구조의 중요성을 살펴보고, 통합적인 생각, 교수단원 등을 활용하여 구조를 담는 내용을 구성해야 한다. 방법면에서는 적절한 자유와 규율로, 발아기(發芽期)에는 과정으로서의 자유를 충분히 누리고, 결실기(結實期)에는 결과로서의 자유를 얻도록 해야 한다. 실제에의 구현 방안으로, 항등식 개념을 구조로 갖는 정점을 지나는 도형의 방정식에 대한 수업안을 구성해 보았다. 결론은 다음과 같다. 첫째, 수학교육에서는 과정으로서의 자유를 누리지 않고는 결과로서의 자유에 도달할 수 없다는 것이다. 발효된 수학의 개념들이 정련되었을 때에 의미 있는 개념이 되어 결과로서의 자유를 누리게 하기 때문이다. 둘째, 수학의 구조를 체득하는 과정에서 두 가지 의미의 자유가 반복된다는 것이다. 과정으로서의 자유와 결과로서의 자유는 씨앗과 열매처럼 반복되면서 서로에게 밑거름이 되는 자유의 양면이다. 셋째, 이 과정에서 수학 교사가 가장 중요한 역할을 한다는 것이다. 수학 교사가 자유의 가치를 알고 소중히 여기며 그 즐거움을 학생도 함께 누리게 해야 할 것이다. The topic in this thesis stems from the current education situation that represses learners' freedom by excessive instruction and compulsory institution, in spite of the education helping learners free from inner prejudice as one of its chief aims. What makes education which foster learners' freedom restrict their freedom? The "freedom" used in this question contain several different meanings. Thus it is inevitable to examine various meanings of freedom. The concept of freedom in the thesis has been discussed in two terms; negative freedom and positive freedom. The former one is 'free from' and the latter one is 'free to'. In this thesis, to discuss with an educational aspect, I call the learners' freedom in the learning process 'freedom-in-process' and the learners' freedom as the result of learning 'freedom-as-result'. There are two views of education focusing on freedom, i.e., liberal education and humanity education. The one purses 'freedom-as-result' and the other 'freedom-in-process'. Liberal educationists assert that education is to cultivate intellectual ability through learning academic subjects such as seven liberal arts and training and the freedom can be acquired as a result of the education. Humanity educationists, however, argue that education should permit learners to enjoy freedom while they're learning. In the respect of mathematics education, both educationists regard mathematics as the subject aiming to freedom-as-result, but humanity educationists consider freedom-in-process more than liberal educationists. Comparing these views comes to the fact that two approaches complement each other. These implication is applied to mathematics education splitting to its contents, methods and practical applications. Because mathematics is the abstract subject, learners acquire freedom-as-result through its structures. Hence it ought to be composed of contents recognizing its structures. For this purpose, I would look into the concepts of freedom and the consequence of structures in the history of mathematics and suppose the methods of unification and teaching units to organize its contents. In class, a rhythmic interplay of freedom and discipline may lead learners to enjoy freedom-in-process in sprouting period and acquire freedom-as-result in fruiting period. To realize this, the lesson plan is made of equations of plane or space figures containing the concept of identical equation as their important structures. Through this discussion, the conclusions are as follows; First, learners who enjoy freedom-in-process get to obtain freedom-as-result in mathematics eduacation. Because the concepts of mathematics refined in fermentation obtain their true meaning and their meaningful concepts make learners obtain freedom-as-result. Second, freedom-in-process and freedom-as-result appear repeatedly in the process of looking for and gaining structures. Freedom-in-process and freedom-as-result are both faces of coin, like seed and fruit which are related mutually and fertilized each other. Third, it is the mathematics teacher that plays an essential role in this process. Therefore, Mathematics teacher must have awareness of the value of freedom, cherish the freedom, and enjoy it with his students. And through this discussion, students can have an opportunity to step up to "freedom".
김민주 대구가톨릭대학교 신학대학원 2011 국내석사
Modern people’s intense aspirations toward freedom is so special to create a ethical autonomy trend even though not general. But this trend is wrong as the Holy Father Pope John Paul Ⅱ pointed out. Christians are also affected by it inevitably, because they live in the real world. Therefore, this study researches on human freedom as the virtue of practical morality in the Christian's life starting from the understanding of the freedom First of all, in order to enlarge the understanding of the freedom, this study examined the transition process of philosophical and theological concept of the freedom, which was debated in various areas in the human history. And, this study considered the teaching in the Council and Pope's Documents carefully which were promulgated to apply the Jesus Christ’s teaching to the social and moral problems. It also searched for the classification of the freedom from the viewpoint of traditions on moral theology, essence of freedom, revealed morphological characteristics of freedom and multiple concepts of freedom. Next, this study examined Christians, Christianity, the source of freedom and the structure of freedom. According to the results of examine, it is known that Christianity is a revealed religion established by the God who create the universe, and Christians are the people who believe and follow Jesus Christ. And also, this study reilluminated that Jesus is the origin of Christian's freedom through the Bible and the studies for Jesus Christ of C. Duquoc and Ernst Käsemann. At the same time, this study illuminated that the origin of the freedom is Jesus because in the theological and religious sense, God's plan of salvation is performed by the Jesus. In addition, from the models of freedom appearing in Jesus' teaching, this study examined that the types of Christian's enjoyable freedom are the freedom in the Christ, the freedom of the obedience and the freedom for obedience in the obedience of Christ. On the other side, the use of the freedom in the view of Christianity is ultimately related to the salvation, so this study examined that it takes not only a moral responsibility itself but also personal relationship with God. Finally, so called moral Magna Carta, the eight conditions of happiness in the Beatitudes(Mt 5,3-10) which are the Jesus' core teaching, was reviewed in the perspective of moral theology as the model of freedom to be pursued. As a result, this study confirmed that the freedom for poverty in spirit, the freedom for sorrow, the freedom for meekness, the freedom for righteousness, the freedom for mercy, the freedom for purity in heart, the freedom for peace, the freedom for suffering persecution, i.e. the eight conditions of happiness in the Beatitudes are to be pursued as the true Christian's freedom. Previous research on ‘the eight conditions of happiness’ of ‘the declare of happiness - the Beatitudes’ are related to Christian's freedom is so scarcely that this study is unique and meaningful at least.
사회과 법 영역 학습경험의 한계와 대안적 학습경험 연구 : 자유권적 기본권을 중심으로
The concept of rights occupies an important position within the social studies and law education. The social studies department is obligated to convey the citizenship necessary to solve individual and social problems in civil society, and in this case, citizenship is inherent in the ability to demand their legitimate rights as much as possible. In this way, social studies should be able to properly convey the concept of rights, the essence of citizenship, to learners and induce meaningful learning experiences. According to this context and importance, there is also a view that the essence of legal education is returned to rights education. However, most learners today are unaware of the lack of knowledge of rights, as well as how to exercise rights correctly and think critically. Most of the rights education in the social and legal fields for learners is conducted only in the form of listing the types of rights. This type of education limits the opportunity to think about the infringement of other people's rights, restrictions on their rights, and how to properly exercise their rights, and ultimately, fostering citizenship necessary for civil society is also likely to fail. In other words, learners have a limited learning experience in the knowledge area among the contents related to the knowledge, function, value, and attitude of rights. In addition, the abstraction of the concept of rights causes learners to feel unfamiliar and difficult about the concept of rights. Therefore, it is highly related to learners' lives, and it is necessary to provide learning experiences focusing on the contents that learners can find in their own living areas. Nevertheless, current rights education delivers learning experiences focusing on cases that are less relevant to descriptions of forms unrelated to the context of learners' lives. Based on this problem consciousness, this study aims to critically examine what and how the concept of rights within the current social studies and legal education conveys. In particular, this study was conducted focusing on the basic rights of free rights. In the case of the right to freedom, it is one of the core competencies of citizenship and is a key right that needs to have high importance in social studies and have meaningful learning experiences. Therefore, in addition to the transmission of biased knowledge related to the concept and type of freedom, the learning experience of freedom should be organized in various directions, such as the relationship between other people's rights and how to exercise it correctly. In response to this discussion, this study attempted to find out whether the right of freedom learning experience in the current social studies and law field delivers meaningful content to learners, and analyzed the contents by analyzing high school 「integrated society」 and 「politics and law」 textbooks. Prior to this, elements of learning experience of freedom were extracted, focusing on the discourse of rights discussed in law and the theoretical background related to freedom. In addition, Dewey's concept of life interest was used as a concept to understand whether learning experiences related to learners' living areas were presented. An analysis framework was designed focusing on the elements related to the learning experience of freedom identified from the theoretical background, and through this, the elements of the learning experience of freedom were critically reviewed in high school 「integrated society」 and 「politics and law」 textbooks. At this time, this study conducted textbook analysis through the content analysis method, which is an analysis method that derives valid reasoning from data. This is largely divided into quantitative content analysis and qualitative content analysis, and this study used a complementary mixture of the two methods. The results of the content analysis are as follows. The current freedom learning experience focused on the knowledge area among the various aspects of freedom, and among them, content related to what the definition of freedom was and what kind of freedom was accounted for a high proportion. In addition, the presented content was also presented in a form unrelated to the learners' lives. This characteristic leads to the following problems. First, there is a problem that the cognitive burden increases when learners learn the content of freedom. If the concepts are continuously listed without a specific explanation, the learner is in a situation where memorization is repeated meaninglessly. Second, there is a limit to fully learning the dynamic side of the right to freedom. The ultimate goal of learning the right to freedom in social studies is not to understand the definition of a fragmentary concept. It is about realizing what it means to claim one's freedom, and knowing how to relate to the rights of others and how to use them in this process. However, there are limitations in achieving these goals through the current learning experience of the free right to freedom. Therefore, this study proposed a comprehensive right to freedom centered on the general right to freedom of action as an alternative right learning experience. The current content of freedom and basic rights presented individual rights in a disconnected form. Therefore, learners are no different from learning the contents of individual rights from each other, and through this, there are limitations in grasping the correlation between freedom rights in each area. To compensate for this, this study suggested a form of learning experience in which a comprehensive form of freedom area was first presented and then a discussion on freedom expressed within a specific living area was conducted. 사회과 법 영역 내에서 권리 개념은 중요한 위치를 차지하고 있다. 사회과는 시민사회에서 개인과 사회의 문제를 해결하기 위해 필요한 시민성을 전달해야 하는 의무가 있으며, 이 때, 시민성은 자신의 정당한 권리를 최대한 요구할 수 있는 능력을 본질로 한다. 이처럼 사회과는 시민성의 본질인 ‘권리 개념’을 올바르게 학습자들에게 전달하고, 유의미한 학습경험을 유발할 수 있어야 한다. 이러한 맥락과 중요성에 따라 법교육의 본질은 권리 교육으로 환원된다는 관점 역시 존재한다. 그러나 오늘날 대부분의 학습자들은 권리의 지식에 대한 부재와 더불어 권리를 올바르게 행사하고, 비판적으로 사고하는 방법마저 인지하지 못하고 있다. 학습자들 대상으로 진행되는 사회과 법 영역의 권리 교육은 대부분이 권리의 종류를 나열하는 형태의 교육만 이루어지고 있다. 이와 같은 교육 형태는 자신이 권리를 행사할 때 발생하는 타인의 권리침해, 자신의 권리 제한, 권리를 올바르게 행사하는 방법 등에 대한 사고를 할 수 있는 기회를 제한시키고, 궁극적으로 시민사회에 필요한 시민성을 육성하는 것 역시 실패할 가능성이 높아진다. 즉, 학습자들은 권리의 지식, 기능, 가치 및 태도와 관련된 내용 중 지식 영역에 한정된 학습경험을 가지게 된다. 또한 권리 개념의 추상성은 학습자들이 권리 개념을 낯설어하고 어려워하는 원인이 된다. 그렇기 때문에 학습자들의 삶과 관련성이 높고, 학습자들이 자신의 생활영역에서 발견할 수 있는 내용을 중심으로 학습경험을 제공해야 한다. 그럼에도 불구하고 현재 권리 교육은 학습자들의 삶의 맥락과 무관한 형태의 서술과 관련성이 떨어지는 사례를 중심으로 학습경험을 전달하고 있다. 이러한 문제의식에 기반하여 본 연구는 현행 사회과 법 영역 내 권리 개념이 어떠한 내용을 어떻게 전달하고 있는지 비판적으로 고찰하고자 한다. 특히, 본 연구는 자유권적 기본권을 중심으로 본 연구를 진행하였다. 자유권의 경우 시민성의 핵심 역량 중 하나로 사회과 내에서 높은 중요성을 가지고, 유의미한 학습경험을 가질 필요가 있는 핵심적인 권리이다. 따라서 자유권의 학습경험 역시 자유권의 개념, 종류와 관련된 편파적인 지식의 전달 외에도, 타인의 권리 간 관계, 올바르게 행사하는 법과 같이 다양한 방향으로 구성되어야 할 것이며, 학습자들이 추상적인 형태로 내용을 학습하기 보다는 자신의 삶의 영역 속에서 어떻게 구현되는지 파악할 수 있도록 학습해야 할 것이다. 이와 같은 논의에 따라 본 연구는 현행 사회과 법 영역 내 자유권 학습경험이 유의미한 내용을 학습자들에게 전달하고 있는지 파악하고자 하였고, 이를 고등학교 「통합사회」와 「정치와 법」 교과서를 분석 대상으로 하여 내용을 분석하였다. 이에 앞서 법학에서 논의된 권리 담론과 자유권과 관련된 이론적 배경을 중심으로 자유권의 학습경험 요소들을 추출하였다. 또한 학습자들의 생활영역과 관련된 학습경험이 제시되고 있는지 파악하기 위한 개념으로서 듀이의 생활관심 개념을 활용하였다. 이론적 배경에서 파악한 자유권의 학습경험과 관련된 요소를 중심으로 분석 틀을 설계하였고, 이를 통해 고등학교 「통합사회」와 「정치와 법」 교과서에 자유권 학습경험 요소를 비판적으로 검토하였다. 이 때, 본 연구는 내용분석(content analysis) 방법을 통해 교과서 분석을 진행하였는데, 내용분석은 자료로부터 타당한 추론을 이끌어내는 분석방법이다. 이는 크게 양적 내용분석과 질적 내용분석으로 구분되는데, 본 연구는 두 가지 방법을 상호보완적으로 혼합하여 활용하였다. 내용분석의 결과는 다음과 같다. 현행 자유권 학습경험은 자유권의 다양한 측면 중 지식 영역에 초점이 맞추어져 있었고, 그 중에서도 자유권의 정의가 무엇인지, 어떠한 종류가 있는지와 관련된 내용이 높은 비중을 차지하고 있었다. 또한 제시된 내용 역시 학습자들의 삶과 무관한 형식으로 제시되고 있었다. 이러한 특징은 다음과 같은 문제점을 낳는다. 첫째, 학습자가 자유권의 내용을 학습함에 있어 인지적 부담이 증가하는 문제를 낳는다. 구체적인 설명 없이 개념이 지속적으로 열거되는 경우 학습자는 무의미하게 암기를 반복하는 상황에 처하게 된다. 둘째, 자유권의 역동적인 면을 충분히 학습하기에는 한계가 존재한다. 사회과에서 자유권을 학습하는 궁극적인 목표는 단편적인 개념의 정의를 이해하는 것이 아니다. 자신의 자유를 주장하는 것이 어떠한 의미를 지니는지 깨닫고, 이 과정에서 타인의 권리와 어떤 관계를 맺으며, 어떻게 활용해야 하는지 아는 것에 있다. 그러나 현행 자유권의 학습경험을 통해서 이러한 목표를 달성하기에는 한계점이 존재한다. 따라서 본 연구는 대안적 자유권 학습경험으로서 일반적 행동자유권을 중심으로 하는 포괄적인 자유권을 제안하였다. 현행 자유권 및 기본권의 내용은 개별적인 권리를 단절된 형태로 제시하고 있었다. 따라서 학습자들은 서로 개별적인 권리의 내용을 배우게 되는 것과 다름 아니며, 이를 통해 각 영역별 자유권 간 상관관계를 파악하기에도 한계점이 존재한다. 본 연구는 이를 보완하기 위해 포괄적인 형태의 자유 영역을 우선적으로 제시한 뒤, 구체적인 생활영역 내에서 발현되는 자유에 관한 논의를 진행하는 형태의 학습경험을 제안하였다.
병원성 파울러자유아메바의 전체세포 추출액에 의한 신경소교세포주의 사이토카인 발현 양상
Naegleria fowleri, a free living amoeba widespread in moist soil, water and sediment, exist as a virulent pathogen causing fetal primary amoebic meningoencephalitis (PAME) in experimental animals and in human. Microglial cells are the major inflammatory cells in the central nervous system (CNS) and become activated in response to brain injury following trauma and neurogenerative disease. Moreover, activated microglial cells are known to release pro-inflammatory cytokines. However, the response of microglial cells to N. fowleri infection was little known. In addition, cell signaling pathway about cytokine induction of microglial cells in N. fowleri infection are unknown. To understand the pathogenic mechanisms involved in the initiation of inflammatory response in the CNS following N. fowleri infection, cytokines production in mouse BV2 cell was analyzed. In addition, mRNA cytokine gene activation was examined by RNase protection assay (RPA) in BV2 cells. We demonstrated here that N. fowleri was potent selective inducer for IL-18 and IFN-γ in mouse microglial cells. IL-18 mRNA induction was higher than IFN-γ induction after N. fowleri lysate stimulation. In order to demonstrate MAPK (mitogen-activated protein kinase) activation by N. fowleri lysate stimulation, Western blot was carried out. On the results, all MAPK were activated. To examine whether MAPK is necessary for the activation of cytokine genes after N fowleri lysate treatment, cells pretreated for 1 h with specific inhibitors for ERK, p38, and JNK (U0126, SB2024190, and JNK inhibitor) were subsequently stimulated with N fowleri lysate. Interestingly, these treatments inhibited IL-18 and IFN-γ mRNA production in a dose-dependent manner. Otherwise, activation of MAPK with cytokines production, activation of a potential downstream transcription factor, NF-κB and AP-1 were assessed by electrophoretic mobility shift assay (EMSA). NF-κB and AP-1 transcription factor are activated after N fowleri lysate treatment. To examine whether activation of NF-κB and AP-1 was assessed following N fowelri lysate treatment in the presence of inhibitors for MAPK. NF-κB activation was dependent of p38 activation, and AP-1 activation was dependent of JNK activation. NF-κB and AP-1 activation was independent of ERK-1/2 activation. In this study, microglial cells treated with N. fowleri lysate induced IL-18 and IFN-γ expression. The MAPK is responsible for N. fowleri-induced IL-18 and IFN-γ expression in microglial cell treated with N. fowleri lysate. It may be suggested that cytokines activation are most likely to play a major role in the initiation of inflammatory responses to N. fowleri infection in the CNS. 파울러 자유아메바는 토양, 연못, 습지, 물 및 하수의 침전물 등에 존재하며, 사람이나 실험동물에서 원발성 아메바성 수막뇌염 (PAME: primary amoebic meningoencephalitis)을 일으키는 병독성 병원체이다. 신경소교세포는 중추신경계 (CNS: central nervous system)내의 중요한 염증세포이며, 뇌의 신경변성질환과 손상에 의해 활성화된다. 활성화된 신경소교세포 (microglia)는 염증 반응과 관련하여 사이토카인을 분비하는 것으로 알려져 있다. 원발성 아메바성 수막뇌염을 일으키는 파울러자유아메바 감염 뇌세포에서 사이토카인 발현양상은 충분히 밝혀져 있지 않으며, 또한 사이토카인 발현에 관계된 신호전달에 관한 연구는 미비하다. 본 연구에서는 신경소교세포에 파울러 자유아메바 세포전체추출액을 처리 한 후 사이토카인 분비 양상과 신호전달 체계를 관찰함으로써 면역반응 조절기전을 알아내고자 하였다. 사이토카인의 mRNA 발현양상을 RPA (RNase Protection Assay)방법으로 관찰하였는데, 세포 추출액을 처리한 후 IL-18과 IFN-γ의 두 가지 사이토카인들의 mRNA 발현이 증가되었고, IFN-γ의 발현 보다 IL-18의 발현이 더 증가하였다. 파울러자유아메바의 전체세포추출액에 의해서 MAPK (Mitogen activated protein kinase)활성을 증명하기 위해 Western blot 방법을 시행한 결과, 세 가지 MAPK 모두 활성을 나타냈다. 또 활성이 증가된 이들 MAPK 단백이 사이토카인의 mRNA발현에 관련되어 있는지 알아보기 위해, MAPK 특이 억제제(ERK inhibitor, U0126; p38 inhibitor, SB202190; JNK inhibitor)를 이용하여 실험하였다. 그 결과 세 가지 MAPK 억제제에 의해 IL-18과 IFN-γ의 발현이 감소하는 것을 나타냈다. 파울러자유아메바의 전체 세포추출액에 의한 사이토카인 전사인자 활성을 증명하기 위해 EMSA (Electrophoretic mobility shift assay) 방법을 이용하여 전사활성인자인 AP-1과 NF-κB의 활성을 알아보았는데, 두 가지 전사인자 모두 활성을 보였다. JNK와 p38의 각각의 저해제를 처리한 후 AP-1과 NF-κB 전사인자의 활성이 억제되었다. JNK의 활성은 AP-1과 연관되어 있었고 p38은 NF-κB와 연관되어 있었다. 결과적으로 파울러자유아메바의 전체 세포추출액을 신경소교세포에 자극을 주었을 때, IL-18과 IFN-γ 유전자 발현이 증가되며 그 과정에 MAPK와 AP-1 그리고 NF-κB을 통해서 활성이 일어나는 것으로 관찰되었다. 파울러자유아메바의 전체세포추출액에 의해 마우스 신경소교세포에서 선택적인 사이토카인이 발현됨으로써 아마도 중추신경계 질환에서 면역세포를 유인하기 위하여 사이토카인을 발현하여 염증반응을 개시하는 역할을 할 것으로 생각된다.
자유 발도르프 유치원과 몬테소리 어린이집의 유아교육론 비교 연구
정세희 서울교육대학교 교육전문대학원 2023 국내석사
In this study, Steiner and Montessori, who are well known as an educational program that has had a key impact on early childhood education, education theory are based on educational ideas and educational contents, educational methods, educational environments, teaching aids and media, etc. The purpose of this study was to systematically recognize their educational theories by examining them. To achieve the purpose of this study, the following research questions were set. First, it examines the background of formation of educational ideology and the establishment and development of institutions, which are the basis of each pedagogy that was the source of the establishment of the Free Waldorf Kindergarten and Montessori Daycare Center. Second, the educational theories of the Free Waldorf Kindergarten and the Montessori Kindergarten are explored, and each educational thought, view of children, educational theory, and general characteristics of education are examined. Third, as specific sub-contents of the educational theories of the Free Waldorf Kindergarten and Montessori Daycare Center, the educational purpose, educational content, educational method, educational evaluation, educational environment, teacher's role, operation, and relationship with parents are examined. Fourth, sensory education, movement education, art education, teaching aids and media that appear as general characteristics of free Waldorf Kindergarten and Montessori Daycare Center education are considered. Fifth, the early childhood education of the Free Waldorf Kindergarten and the Montessori Day Care Center is to identify the implications and contemporary significance of today's early childhood education. This study, as a literature study, focused on the data that detailed the educational ideas and methods of Steiner and Montessori, the founders of educational theories that are the basis of the Free Waldorf Kindergarten and Montessori Daycare Center. The meaning of early childhood education was explored by referring to various literature such as related research papers, academic journals, and books by professional scholars, in which data on educational principles and practices, such as the lives and achievements of Steiner and Montessori, educational thought, and practical educational contents and methods, were well described. In order to explore practice cases in Korea, the education of Unhyeon Kindergarten and Free Waldorf School in Gwacheon, which have been providing Montessori education in Korea, was observed. Through this study, the following results were found. Steiner and Montessori, as educational scholars at the end of the 19th century in a historically dark period due to two world wars, presented a new educational concept that could guarantee 'human freedom' in response to school education that was politically and militarily restricted. Based on these educational ideologies, they prepared a place for educational practice, such as the Free Waldorf Kindergarten and the Montessori Kindergarten, and practiced educational reforms that respected the free way of thinking of each student based on the free ideology as a principle. They said that there is a unique law hidden inside the infant, and that each stage has a unique characteristic with a unique developmental stage. Therefore, it is necessary to respect the inner potential of young children as they are in the state of nature, and it is necessary to provide education at the right time by respecting the individual's internal development. Based on this educational concept and view of children, they show the following similarities in the institution's educational purpose, educational principles, educational content, educational method, educational evaluation, educational environment, teacher's role and educational characteristics. First, they set a common goal of human-centered education, that is, education that respects the inner strength and autonomy of young children, confirms the potential for human development, and develops their abilities. Free Waldorf Kindergarten and Montessori Kindergarten organized classes in the form of a mixed age, emphasized individualized education, avoided standardized educational evaluation methods, and showed a negative view of discriminating children in terms of grades. In terms of the educational environment, it was emphasized that it should be composed of a safe and free environment for children, and that teaching aids, toys, classrooms, and buildings should all be aesthetically designed. In addition, the importance of sensory education and movement education was emphasized in common, and the need for movement that young children have essentially was acknowledged. In this way, the pedagogy of Steiner and Montessori share the same core, so similarities can be found in many parts, but since the starting points of the two pedagogies are different, in terms of the method of actually implementing and realizing each ideological theory and education, the following show the same difference. First, in terms of the view of children and educational goals, Steiner viewed human beings as beings belonging to the laws of the universe with a three-intelligence structure from a psychological scientific point of view, and Montessori placed them in the process of human development, in which infants' innate spiritual essence leads to embodiment. saw that there was In other words, they are different in the direction to lead the holistic growth of young children. Also, in the teacher's role, he said that free Waldorf education is important because the teacher's individuality, humanity, spirit, and emotions have a more detailed effect than any other teaching method. It was said that love and affection for infants are required. In addition, in terms of the use of materials and media, liberal Waldorf education views the use of media in early childhood negatively, whereas Montessori teaching aids recognizes the use of media positively. The conclusion drawn by comparing and discussing the educational theories of Free Waldorf and Montessori is as follows. First, focusing on human nature and essence, forming a free personality that respects the inner potential of a human being as it is in its natural state, rather than artificially manipulating something or trying to fit children into a structured class method with external influences. education should be provided. Second, it is necessary to respect the inner potential of young children as they are in the state of nature, and to provide education that meets the needs of young children at the right time according to the individual's internal development. Third, education should be conducted considering the sensory stimulation of infants in an educationally meaningful environment. Steiner and Montessori commonly emphasized the importance of sensory education and movement education. They saw the sensory organs of infants as the door and the first starting point for learning the world. Fourth, when selecting textbooks, manipulatives, and media for young children, it is necessary to consider whether they can expand the 'quality of experience' obtained in the process of interaction between infants and teaching aids and personal meaning. Fifth, teacher education with expertise to carefully observe and reflect the inner development of young children should be prepared. Suggestions for follow-up studies are as follows. It is necessary to conduct field-oriented research on how the theories of Steiner and Montessori are being transformed and applied according to today's era, region, economic level, social and cultural aspects, etc. . 본 연구에서는 유아교육에 핵심적인 영향을 미친 교육프로그램으로 잘 알려진 슈타이너와 몬테소리 교육이론의 기초가 되는 교육사상과 교육의 실제를 알아볼 수 있는 교육내용, 교육방법, 교육환경, 교구와 매체 등을 비교하여 고찰함으로써 그들의 교육이론을 체계적으로 인식하는 데 연구의 목적을 두었다. 본 연구의 목적을 달성하기 위하여 다음과 같은 연구 문제를 설정하였다. 첫째, 자유 발도르프 유치원과 몬테소리 어린이집 설립의 근원이 되었던 각 교육학의 기초인 교육사상의 형성 배경과 기관의 설립 및 발전을 고찰한다. 둘째, 자유 발도르프 유치원과 몬테소리 어린이집의 교육론을 탐색하여 각 교육사상, 아동관, 교육론, 교육의 일반적인 특징을 고찰한다. 셋째, 자유 발도르프 유치원과 몬테소리 어린이집의 교육론의 구체적인 하위내용으로 교육목적, 교육내용, 교육방법, 교육평가, 교육환경, 교사의 역할, 운영 및 학부모와의 관계를 고찰한다. 넷째, 자유 발도르프 유치원과 몬테소리 어린이집 교육의 일반적인 특징으로 나타나는 감각교육, 동작교육, 예술교육, 교구와 매체를 고찰한다. 다섯째, 자유 발도르프 유치원과 몬테소리 어린이집의 유아교육이 오늘날의 유아교육에 영향을 미친 시사점과 현대적 의의를 규명한다. 본 연구는 문헌연구로서, 자유 발도르프 유치원과 몬테소리 어린이집의 기반이 되는 교육이론의 창시자인 슈타이너와 몬테소리의 교육사상과 교육방법이 상세하게 나타낸 자료들을 중심으로 연구하였다. 슈타이너와 몬테소리의 생애와 업적, 교육사상, 실질적인 교육내용과 방법 등과 같은 교육원리와 실제에 대한 자료가 잘 서술된 관련 연구물과 학회지, 전문학자의 서적 등 다양한 문헌을 참고해 유아교육적 의미를 탐색하였다.우리나라의 실천 사례를 탐구하기 위하여 국내에서 몬테소리 교육을 해오고 있는 운현유치원, 과천의 자유 발도르프 학교의 교육을 참여·관찰하였다. 본 연구의 결과릏 요약하면 다음과 같다. 슈타이너와 몬테소리는 19세기 말 두 차례 세계대전으로 역사적으로 암담한 시기 교육학자로서 정치·군사적으로 제약받던 학교 교육에 대응하며‘인간의 자유’를 보장할 수 있는 새로운 교육 개념을 제시하였다. 그들은 이러한 교육이념을 토대로 자유 발도르프 유치원과 몬테소리 유치원이라는 교육 실천의 장을 마련하였으며, 자유 이념을 원칙으로 학생 개개인의 자유로운 사고방식을 존중하는 교육개혁을 실천하였다. 그들은 유아 내면에 숨겨진 고유한 법칙성이 존재한다고 하였고, 고유한 발달단계를 가지고 각 단계 마다 독특한 특성이 있다고 보았다. 따라서 유아 내면의 잠재성을 자연의 상태 그대로 존중할 필요가 있으며 개인의 내적 발달양상을 존중해 적기에 교육을 제공해주어야 한다고 보았다. 그들은 이러한 교육적 개념과 아동관을 기초로 기관의 교육목적과 교육원리, 교육내용, 교육 방법, 교육평가, 교육환경, 교사의 역할 및 교육 특징 등에 있어 다음과 같은 유사점을 나타내고 있다. 먼저, 그들은 인간중심의 교육 즉, 유아 내면의 힘과 자율성을 존중하여 인간이 가진 발달 가능성을 확인하고 그 능력을 발전 시킬 수 있는 교육을 공동의 목적으로 하였다. 자유 발도르프 유치원과 몬테소리 어린이집은 혼합연령의 형태로 학급을 구성하고, 개별화 교육을 중시하였으며, 정형화된 교육평가 방식을 지양하고, 아이들을 성적으로 우열을 가리는 것에 대해 부정적인 시각을 나타냈다. 교육환경에 있어, 아이에게 안전하고 자유로운 환경으로 구성되어야 함을 강조하였으며, 교구와 놀잇감, 교실, 건물은 모두 미적으로 아름답게 설계되어야 한다고 하였다. 또한 공통적으로 감각교육과 동작 교육의 중요성을 강조하였으며, 유아가 본질적으로 가지고 있는 움직임의 욕구를 인정하였다. 이와 같이 슈타이너와 몬테소리의 교육학은 그 핵심을 같이 하기에 상당 부분에서 비슷한 점을 찾을 수 있지만, 두 교육학의 출발점이 다르기 때문에 각 사상적 이론과 교육을 실제적으로 구현하고 실현해내는 방법적인 측면에서 다음과 같은 차이점을 나타낸다. 먼저, 아동관과 교육목표에 있어, 슈타이너는 정신 과학적 관점에서 인간을 삼지적 구조를 가진 우주의 법칙 속에 속한 존재로 바라보았고 몬테소리는 유아가 타고난 정신적인 본질을 육체화로 이어나가는 인간발달 과정상에 놓여있다고 보았다. 즉, 유아의 전인적인 성장을 이끌어 내기 위한 방향성에 있어 상이하다. 또한 교사의 역할에 있어, 자유 발도르프 교육은 교사의 개성과 인간성, 정신, 감정 등이 어떠한 교수법보다 세세한 영향을 미치기 때문에 중요하다고 하였고, 몬테소리는 유아의 자유로운 작업 활동을 확보해주기 위한 수동적이고 겸손한 태도, 유아에 대한 사랑과 애정이 요구된다고 하였다. 그 외, 교구와 매체의 사용에 있어, 자유 발도르프 교육은 유아기 매체의 활용을 부정적으로 보고 있는 반면, 몬테소리 교구에서는 매체의 활용을 긍정적으로 인식하고 있다. 자유 발도르프와 몬테소리의 교육론을 비교하고 논의하여 도출한 결론은 다음과 같다. 첫째, 인간의 본성과 본질에 집중하여 무엇인가를 인위적으로 조작하거나 외부의 영향으로 유아를 구조화된 수업 방식에 맞추려고 하기보다는 한 인간이 가진 내면의 잠재성을 자연의 상태 그대로 존중하는 자유로운 인격을 형성하는 교육이 이루어져야 한다. 둘째, 유아 내면의 잠재성을 자연의 상태 그대로 존중할 필요가 있으며 개인의 내적 발달양상에 따라 적기에 유아의 요구에 맞는 교육을 제공해주어야 한다. 셋째, 교육적으로 의미 있는 환경에서 유아의 감각적 자극을 고려한 교육이 이루어져야 한다. 슈타이너와 몬테소리는 공통적으로 감각교육과 동작교육의 중요성을 강조하였다. 이들은 유아의 감각기관이란 세상을 배우기 위한 문이자 첫 출발점으로 보았다. 넷째, 유아 교재·교구 및 ·매체의 선택할 때는 유아-교구의 상호작용 과정에서 얻는 ‘경험의 질’과 개인적으로 갖는 의미를 확장시켜줄 수 있는지를 고려해야 한다. 다섯째, 유아의 내적 발전을 주의 깊게 관찰하고 이를 반영할 수 있는 전문성을 지닌 교사교육이 마련되어야 한다. 후속연구를 제언하면 다음과 같다. 우리나라와 해외의 자유 발도르프와 몬테소리 교육현장을 심도 있게 관찰하여 슈타이너와 몬테소리의 이론이 오늘날 시대와 지역, 경제적 수준, 사회·문화적 양상 등에 따라 어떻게 변형되어 적용되고 있는지 현장 중심의 연구가 이루어질 필요가 있다.
계약자유원칙에 대한 비판적 연구 : 상대방선택의 자유를 중심으로
최한미 인제대학교 일반대학원 2014 국내석사
사인 간의 계약에서는 아무런 제약 없이 일방이 상대방을 선택하거나 거절할 수 있도록 하는 상대방선택의 자유가 보장되어 오면서 많은 차별의 문제가 발생하고 있다. 계약자유원칙은 ‘자유’라는 미명하에 여타의 인권적 가치들을 사적 영역 밖으로 몰아내 버렸고, 왜 그래야만 하는가라는 질문에는 계약법이 계약자유원칙을 비호하기 위해 만들어 낸 법이론들이 그 대답을 대신해 왔다. 계약자유는 아무 말이 없었다. 그러나 20세기를 거쳐 오면서 현실적 불평등에 직면하게 된 계약자유원칙은 이제 변혁을 시도하고 있다. 약속이론의 대안으로 신뢰이론이 대두되었고, 계약자유의 상대화를 위한 각 영역의 법률들이 계속 증가하고 있다. 마찬가지로 상대방선택의 자유는 각종 차별금지법제의 증가와 사법부의 판결을 통해 점차 상대화되어 가고 있다. 그러나, 이것을 헌법상의 기본권 충돌의 문제로 이해하고 이익형량을 통해서 해결하고자 하는 태도는 또 다른 우려를 불러일으킨다. 지금까지의 계약자유원칙이 때로는 절대시 되어야 할 것으로, 때로는 외부 권력에 의해 제한 내지 수정 되어야 할 것으로 정치·사회·경제적 상황에 따라 다르게 이해되어온 것을 볼 때, 사적 영역에서 인권을 보호하려는 노력들을 계약자유에 대한 제한이라고 이해하는 것은 자유가 우선이냐 평등이 우선이냐 하는 줄다리기 속에서 힘의 논리에 의해 언제든 그 정당성을 잃을 가능성을 내포하고 있는 것이다. 이러한 문제의식에서 출발하여 이 글에서는 차별금지법에 대한 유럽의 입법태도와 사적 영역에서 상대방선택의 자유에 따른 차별에 관한 국내 판례의 태도를 통해 상대방선택의 자유는 여전히 절대적 원리인가를 검토하고, 나아가 계약자유에서 자유의 개념을 ‘불간섭’이 아니라 공화주의적 전통의 자유개념인 ‘비지배’로서 이해할 때 계약당사자 일방이 계약내용과 관련 없는 조건이나 상황을 이유로 행사하는 상대방선택의 자유는 자유가 아니라, 상대방의 자유에 대한 침해임을 밝히고자 한다. 따라서, 상대방선택의 자유는 타인에 대한 계약기회의 거절이 자의적 의사에 기초해 행사된 것인가, 아니면 비자의적 의사에 기초한 것인가에 따라 정당한 것으로 인정될 수도 있고, 반대로 정당하지 않은 것이 될 수도 있음을 주장한다. 이를 통해 상대방선택의 자유는 보편타당한 ‘원리로서의 지위’에서 물러나야 하고, 나아가 계약자유원칙이라는 지붕을 받치고 있던 하나의 기둥이 무너짐으로써 계약자유원칙 또한 재구성되어야 함을 강조한다. The freedom of choosing the other party, which guarantees the right to the selection and rejection of the other party without any restrictions, in agreements between private individuals has raised a lot of discrimination problems. The principle of freedom of contract has driven the other human right values out of the private domain under the name of "freedom," and the legal theories created by the law of contract to protect the principle of freedom of contract have answer the questions as to why. The principle of freedom of contract is, however, making an attempt at reform, having faced the realistic inequality in the 20th century. The trust theory is emerging as an alternative to the promise theory, and laws are on the rise in each and every field for the relativism of freedom of contract. Similarly, the freedom of choosing the other party is gradually becoming relative due to the increasing number of acts to forbid all kinds of discrimination and the judgments of the judicature. However, another type of concern is raised by the attitude of understanding those developments as an issue of clash between the basic rights in the Constitution and resolving them through balancing of interest. Given that the principle of freedom of contract has been understood differently according to the political, social and economic situations, for instance, as something that should be regarded as an absolute principle sometimes and as something that should be limited or revised by external force other times, the understanding the efforts to protect human rights in the private domain as an attempt to restrict freedom of contract has an inherent possibility of losing its legitimacy any time by the logic of power in the tug of war between freedom and equality. Making a start with the problematic consciousness, this study set out to review if the freedom of choosing the other party would remain as an absolute principle through the legislative attitude of Europe regarding the anti-discrimination act and the attitude of the South Korean precedents about discrimination according the freedom of choosing the other party in the private domain. The study also aimed to demonstrate that freedom of choosing the other party exercised by one of the contract parties for the conditions or situations no related to the content of contract was not freedom but violation of freedom of the other party, given that the concept of freedom in freedom of contract is understood as "non-domination," a concept of freedom in the heritage of republicanism, instead of "non-interference." The study thus argued that freedom of choosing the other party could be recognized as legitimate or illegitimate according to whether the rejection of contract opportunity by others was voluntary or involuntary. The study would maintain that freedom of choosing the other party should lose its "status as a universal and valid principle" and that the principle of freedom of contract should be reorganized as one of the pillars supporting the principle had collapsed.