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      • 조류인플루엔자에 대한 보건대학원생과 경영대학원생의 지식, 태도 및 행동 비교

        김은엽 고려대학교 보건대학원 2005 국내석사

        RANK : 13880191

        Background : This study has been carried out for the purpose of investigating on general, actional, knowledge, attitude and information factors to exert influence upon the comparative study of graduate schools and management schools in weighing the advantages of against the avian influenza. Method : This study was carried out for 496 students in graduate school 2-5 for 2 months between November 11, 2004 and December 31, 2004. This study was designed as a cross-sectional study and the subjects were the graduate school and management school of the second to fifth grade students of 11 graduate and 14 management schools located in South Korea. Data were collected by structural questionnaire and was taken only by on-the-spot visit review. The definition for Avian influenza was based on that of CDC and WHO. Data were analyzed using SPSS 12.0 program. Chi-square test, t-test and logistic regression analyses were done and p-value below 0.05 was considered to be statistically significant. Result : The research is focused on the knowledge and the attitude of the graduate school of public health versus that of management school toward avian influenza, the newly emerging infectious disease. First, Respondent sex conducted the question answer back whose with 280 people total 496 hit women and 216 people men the woman are many more or less. When it saw and the school 93 person men and 150 person women was, the management graduate school with 123 person men and 130 person women the woman question answer back was more the male than each. Second, Respondent avian influenza to against the knowledge which relates with the person, it shared in 3 fields and the result prevention relation 6 question items which it analyzes when it saw, school 3.571.20 point, the management graduate school 3.251.00 were analyzed with point. The civil official countermeasure 11 question item when it saw, school 7.381.81 point, the management graduate school 7.830.11 was analyzed with point. The general 4 question item when it saw, school 2.801.04 point, the management graduate school 2.971.06 was analyzed with point. Third, Respondent avian influenza to against an attitude and the conduct which relate with the person, it disposes generally well, with information which is inaccurate about lower the case which even until now does not eat the chicken occurs. Fourth, It is a birds of the research object person and when avian influenza to against the civil official countermeasure which relates with the person, it sees and the school the management graduate school compared to civil official countermeasure of the government and the specific authorization is insufficient and that the problem is serious, answer back. Fifth, Respondent avian influenza to against information find which relates with the person identical, two group all it was and information course answer back with the Internet most plentifully, it was visible the tendency where also the contents of information which comes in contact is similar. Conclusion : The concrete research currently is the birds which occurs avian influenza to the scientific approach against the popularity to possibility it does to be with it begins the occurrence country to will contribute in citizen hygiene of the nation. It tries to observe like this thing, petty the possibility actuality more person coming in contact it is from the government and the specific authorization, the possibility of doing as a favor in order to be, compared to must conduct an effort, the citizens apply all intelligence report course it will be able to apply many new species infectious disease and other good information they come in contact and it will be able to apply rightly in real life in order, they think must conduct an effort. When is like that with after words the some branch is considered together. Becomes the improvement against a new species infectious disease and. Offense government counter-measure preparation, disease star whole year monitoring system mobility, hygienic civil official reinforcement and infectious disease preparation reel three inspection, being quick, time the joint ownership back of the specialty manpower voice which is necessary to the security and an infectious disease leaving alone of the facility which is necessary to a early detection of the prevention public relation reinforcement which is appropriate and new species infectious disease and non-proliferation countermeasure and an infectious disease leaving alone and the data regarding an infectious disease is it. Background : This study has been carried out for the purpose of investigating on general, actional, knowledge, attitude and information factors to exert influence upon the comparative study of graduate schools and management schools in weighing the advantages of against the avian influenza. Method : This study was carried out for 496 students in graduate school 2-5 for 2 months between November 11, 2004 and December 31, 2004. This study was designed as a cross-sectional study and the subjects were the graduate school and management school of the second to fifth grade students of 11 graduate and 14 management schools located in South Korea. Data were collected by structural questionnaire and was taken only by on-the-spot visit review. The definition for Avian influenza was based on that of CDC and WHO. Data were analyzed using SPSS 12.0 program. Chi-square test, t-test and logistic regression analyses were done and p-value below 0.05 was considered to be statistically significant. Result : The research is focused on the knowledge and the attitude of the graduate school of public health versus that of management school toward avian influenza, the newly emerging infectious disease. First, Respondent sex conducted the question answer back whose with 280 people total 496 hit women and 216 people men the woman are many more or less. When it saw and the school 93 person men and 150 person women was, the management graduate school with 123 person men and 130 person women the woman question answer back was more the male than each. Second, Respondent avian influenza to against the knowledge which relates with the person, it shared in 3 fields and the result prevention relation 6 question items which it analyzes when it saw, school 3.571.20 point, the management graduate school 3.251.00 were analyzed with point. The civil official countermeasure 11 question item when it saw, school 7.381.81 point, the management graduate school 7.830.11 was analyzed with point. The general 4 question item when it saw, school 2.801.04 point, the management graduate school 2.971.06 was analyzed with point. Third, Respondent avian influenza to against an attitude and the conduct which relate with the person, it disposes generally well, with information which is inaccurate about lower the case which even until now does not eat the chicken occurs. Fourth, It is a birds of the research object person and when avian influenza to against the civil official countermeasure which relates with the person, it sees and the school the management graduate school compared to civil official countermeasure of the government and the specific authorization is insufficient and that the problem is serious, answer back. Fifth, Respondent avian influenza to against information find which relates with the person identical, two group all it was and information course answer back with the Internet most plentifully, it was visible the tendency where also the contents of information which comes in contact is similar. Conclusion : The concrete research currently is the birds which occurs avian influenza to the scientific approach against the popularity to possibility it does to be with it begins the occurrence country to will contribute in citizen hygiene of the nation. It tries to observe like this thing, petty the possibility actuality more person coming in contact it is from the government and the specific authorization, the possibility of doing as a favor in order to be, compared to must conduct an effort, the citizens apply all intelligence report course it will be able to apply many new species infectious disease and other good information they come in contact and it will be able to apply rightly in real life in order, they think must conduct an effort. When is like that with after words the some branch is considered together. Becomes the improvement against a new species infectious disease and. Offense government counter-measure preparation, disease star whole year monitoring system mobility, hygienic civil official reinforcement and infectious disease preparation reel three inspection, being quick, time the joint ownership back of the specialty manpower voice which is necessary to the security and an infectious disease leaving alone of the facility which is necessary to a early detection of the prevention public relation reinforcement which is appropriate and new species infectious disease and non-proliferation countermeasure and an infectious disease leaving alone and the data regarding an infectious disease is it.

      • 기후 변화 데이터를 활용한 조류인플루엔자 발생 예측 방법

        오수빈 동국대학교 2018 국내석사

        RANK : 13880191

        조류인플루엔자는 닭, 오리 등과 같은 가금류에게 바이러스 감염으로 발생하는 급성 바이러스성 전염병이며 최근 피해가 급증하고 있다[1]. 조류인플루엔자는 우리나라에서 2003년 12월 처음 발병된 이후 현재까지 지속적으로 진행되고 있다[2]. 2016년에는 가금류 3,430만 마리가 살처분되면서 살처분 비용 증가, 사료회사나 유통의 피해와 더불어 인체감염 등 사회적 파장으로 크고 작은 경제적 손실이 발생하고 있다[2]. 이러한 문제들을 사전에 방지하기 위하여 조류인플루엔자 발생 요인을 분석하고, 조류인플루엔자 발생 예측 방법의 연구가 진행되고 있다. 기존 연구는 조류인플루엔자 발생과 기온의 차이, 평균 기온의 영향 분석과 조류인플루엔자 발생 지역 분석 등으로 연구가 진행되고 있다[3-6]. 그러나 기존 연구에서는 조류인플루엔자 발생에 영향을 미치는 요소에 대한 고려가 부족하다. 기존 연구의 문제점은 다음과 같다. 첫째, 조류인플루엔자 발생 예측을 위한 다양한 기후 변화 데이터의 분석 방법의 고려가 부족하다. 조류인플루엔자의 발생원인 중 계사 내의 오염된 공기, 물, 사료 등의 부유물질이 바람에 의해 바이러스가 이동하여 간접적인 접촉으로 전염되어 발생하고 있다. 이와 같이 간접적인 접촉에 의한 요소들로 바람의 빈도, 풍속, 풍향, 평균 기온, 일교차, 상대 습도와 같은 기후 변화 데이터의 분석 방법 연구가 필요하다. 둘째, 조류인플루엔자 발생 예측율의 정확도를 높이기 위한 질병 특성에 맞는 질병 확산 모델의 연구가 부족하다. 전국적으로 조류인플루엔자의 발생 확대로 인하여 많은 피해가 발생되고 있다. 현재 조류인플루엔자 피해는 역대 최대의 손실을 야기하게 되었다. 조류인플루엔자 발생으로 인한 피해를 최소한으로 줄일 수 있도록 높은 예측율을 보이는 조류인플루엔자 질병 확산 모델의 연구가 필요하다. 본 논문에서는 조류인플루엔자 발생 데이터와 기후 변화 데이터를 활용한 조류인플루엔자 발생 예측 방법을 제안한다. 제안한 방법의 흐름은 다음과 같다. 첫째, 조류인플루엔자 발생 데이터와 기후 변화 데이터의 상관분석을 통해 지역별 특징을 파악한다. 둘째, 지역별 조류인플루엔자 발생 가중치와 지역별 조류인플루엔자 확산 가중치를 산출한다. 마지막으로, 산출된 가중치를 기반으로 질병 발생을 예측하는 질병 확산 모델을 생성한다. 생성된 질병 확산 모델을 통해 조류인플루엔자 발생 예측을 한다. 본 논문의 구성은 다음과 같다. 2장에서는 관련 연구로 상관분석과 조류인플루엔자 예측 방법, 질병 확산 모델에 관해 기술한다. 3장에서는 본 논문에서 제안하는 기후 변화 데이터를 활용한 조류인플루엔자 발생 예측 방법에 대하여 기술한다. 4장에서는 제안한 방법의 실험 평가 결과를 기술하고, 5장에서는 결론을 맺는다.

      • 국내분리 H7 조류 인플루엔자 바이러스의 특성 분석 및 백신의 교차 방어 효능 평가

        김영일 충북대학교 2018 국내박사

        RANK : 13880191

        조류 인플루엔자 바이러스의 인간에 대한 전파는 새로운 유행성 독감의 지속적인 위협을 나타낸다. 조류 인플루엔자 바이러스들 중 H5, H6, H7, H9 그리고 H10 아형의 바이러스들에 의한 산발적 인간감염의 사례로 보고가 되었고, 일반적으로 가벼운 임상증상에서부터 복잡한 형태의 인플루엔자 감염증상에 의한 폐렴과 장기부전을 일으켜 사망에까지 이르게 할 수 있다. 특히 H7형 조류 인플루엔자 바이러스는 2013년에 중국에서 H7N9형의 인체감염증 바이러스가 발생한 이후 현재까지도 지속적인 인체감염 사례와 사망자가 발생하고 있다. 또한 H7NX형의 바이러스가 세계적으로 유행성 독감을 일으킬 가능성이 높다. 그러므로 본 학위논문의 전체적인 목표는 (a) 2005년부터 2014년까지 국내에서 분리된 H7 아형 저병원성 조류 인플루엔자 바이러스의 유전적 진화 및 잠재적 병원성을 분석하고자 하였으며, (b) 포유류에서 계대를 통해 조류인플루엔자 H7N6형 바이러스가 포유류 적응성 바이러스로 변화하게 된 요인의 규명과 포유류 간 전파능을 획득하게 된 요인을 규명하고자 하였고, (c) H7형 인플루엔자 바이러스에 대한 면역반응 및 교차 방어능 효과를 평가하고자 하였다. 첫 번째 목표를 규명하기 위하여, 2005 년부터 2014 년까지 국내 야생 조류에서 분리된 H7형 조류 인플루엔자 바이러스의 특징을 분석하였다. 각 바이러스의 유전자 분석 결과, 모든 바이러스가 유라시아 계통의 H7 조류 바이러스로 최소 12 개의 다른 유전자형으로 나눌 수 있었고, 국내에서 분리한 대부분의 H7형 인플루엔자 바이러스는 적어도 하나의 고병원성 A/Sck/Hong Kong/YU100/2002 (H5N1) 조류인플루엔자 바이러스의 유전자 분절을 포함하고 있었으며, 적어도 2 개의 항원 그룹으로 나눌 수 있음을 확인하였다. 중국의 H7N9형 바이러스와 유전적으로 동일한 균주를 검출하지는 못했지만, 혈구응집억제반응 분석을 통해 중국의 H7N9 바이러스와 일부 균주의 교차 반응성을 확인할 수 있었다. 동물 연구에 따르면 대부분의 H7형 인플루엔자 바이러스 유전형은 사전 적응 없이 마우스 및 닭의 폐에서 증식 할 수 있으며, 특히 일부 H7N4 및 H7N7 아형은 마우스에서 폐사율을 나타내었다. 그러므로 조류 인플루엔자 바이러스의 마우스 감염 시험을 통해 일부 H7형 조류 인플루엔자 바이러스는 사전 적응 없이 포유류의 폐에서 증식과 병원성을 나타낼 수 있음을 확인하였다. 두 번째 흰 족제비에서의 계대를 통해 생성된 포유류 적응성 H7N6 바이러스에 대한 연구로 가금류, 마우스 및 흰 족제비에서 다기관 감염성을 보인 A/Mallard duck/Korea/6L/2007(H7N6) 조류인플루엔자 바이러스를 흰 족제비에서 계대한 결과 흰 족제비 적응성 바이러스 (Ferret adaptation 6L; FA6L)가 생성되었다. 야생형 6L (WT6L) 조류인플루엔자 바이러스를 흰 족제비에서 6차례의 계대 후 상부 (6.45 log10EID50/mL) 및 하부 (5.57 log10EID50/mL) 호흡기 표본에서의 증식성이 1000배 이상 증가하였다. 포유류 적응성 FA6L 바이러스와 야생형 WT6L의 유전자 비교분석 결과 8 개의 유전자 분절 중 NS 유전자를 제외한 7 개의 유전자 분절에서 각각 PB2 (S286G, A684T), PB1 (F166L), PA (E319K, G631V), HA (A137S, E312K), NA (A145V), NP (T232I), 그리고 M (A227S) 유전자들의 아미노산 치환이 관찰되었다. 야생형 WT6L 바이러스와 포유류적응성 FA6L의 조류와 포유류 숙주의 수용체에 대한 친화도를 측정한 결과, HA 유전자가 숙주의 수용체에 결합하는 결정적인 역할을 하며, H7N6 바이러스에서 HA137S의 돌연변이는 조류에서 포유류의 수용체로의 친화성을 가지게 하는 요인임을 확인하였다. 또한 흰 족제비 감염 연구는 FA6L 바이러스가 3 두의 간접 접촉 흰 족제비 중 2 두의 비강 세척 분비물에서 바이러스가 검출되었음을 통해 FA6L 바이러스의 병원성과 전파능이 WT6L 바이러스의 병원성과 전파능보다 증가하였음을 입증하였다. FA6L 바이러스가 전파능을 획득하게 된 요인을 규명하기 위하여 재조합 FA6L 바이러스를 이용한 동물에서의 바이러스 전파능 연구를 진행하였고, HA137S-312K 및 NA145V의 돌연변이가 H7N6 바이러스에서 흰 족제비간 전파에 결정적인 역할을 한다는 것을 입증하였다. 이 결과는 H7N6 바이러스의 HA 및 NA 유전자에 대한 아미노산 치환이 흰 족제비간 전파가능성이 있는 바이러스로 변화시킬 수 있음을 증명하였다. 세 번째 연구의 목적으로, 최근 H7N9 바이러스를 비롯한 다양한 H7 인플루엔자 바이러스에 의한 인간 감염에 대한 우려로 유라시아 H7 조류 인플루엔자 바이러스의 유전적 관계와 교차 방어 효과를 평가하였다. 최근 유라시아 H7 바이러스는 그룹 내에서 상대적으로 높은 아미노산 동정률 (94.8-98.8 %)과 그룹 간 낮은 아미노산 동정률 (90.3-92.6 %)로 두 개의 다른 계통으로 분리 될 수 있음을 계통학적 및 유전자 분석 결과 밝혀냈다. 각 항원형 그룹의 선택된 균주에 의한 생체 내 면역화는 그룹 특이적 교차면역원성이 유도 된 반면, 교차 면역원성 혈구응집억제반응 (HI) 역가는 이종 그룹 바이러스가 동종 그룹 바이러스에 비해 약 4 배 더 낮다는 것을 확인하였다. 또한, 항원형 그룹 I (RgW109/06) 백신은 다양한 그룹 I 바이러스로부터 면역화 된 마우스를 100 % 방어하는 반면, 면역화 된 마우스의 20 내지 40 %만이 이종 II 그룹 바이러스의 공격접종에서 생존하고 폐에서 높은 바이러스 역가를 나타냈다. 더욱이 항원형 그룹 II (RgW478/14) 백신도 마우스를 항원형 그룹 II 바이러스의 공격접종으로부터 100% 방어했지만 항원형 그룹 I 바이러스에 대한 교차 방어를 유도하지 못하였다. 그러나 항원형 그룹 I의 하위계통인 RgAnhui.1/13으로 백신한 경우, 항원형 그룹 I과 II 바이러스에 대한 공격접종에서 면역화된 마우스를 교차 방어하고 폐에서의 바이러스 역가를 크게 약화 시키는 것을 확인하였다. 흥미롭게도 RgAnhui.1/13 백신을 접종한 마우스의 면역 혈청은 다른 백신을 투여한 마우스의 혈청보다 넓은 중화 스펙트럼을 보였다. 이러한 결과는 최근 중국의 인체 감염성 H7N9 균주가 유라시아 H7 바이러스에 대한 광범위한 교차 방어 백신으로 사용될 수 있음을 제시한다. 결론적으로, 본 연구는 전 세계적으로 대유행의 가능성이 있는 H7형 인플루엔자 바이러스에 대해 국내에서 분리되는 H7형 인플루엔자 바이러스의 유전적인 특성의 규명과 잠재적인 병원성을 보유하고 있음을 증명하여 지속적인 감시 및 모니터링의 필요와 향후 발생 가능한 H7형 변종 바이러스에 대한 이해와 대유행 가능성을 예측할 수 있는 자료를 제시하였고, H7N6형의 인플루엔자 바이러스를 통해 단 몇 개의 유전자 치환만으로도 포유류 적응성 및 전파능을 획득하게 됨을 규명하였다. 또한 유라시아 계통의 H7형 바이러스의 백신의 효능을 평가하여 중국의 H7N9형 인플루엔자 바이러스가 유라시아 계통의 H7형 바이러스에 대한 광범위한 교차 방어 백신으로 사용될 수 있는 백신 후보주로서의 가능성을 제시하였다. The spread of avian influenza virus to humans possess a continuing threat of a new pandemic flu. Reports shows that there are sporadic human infection due to viruses of H5, H6, H7, H9 and H10 subtypes of avian influenza viruses. Generally, symptoms of influenza infections can be complicated from mild clinical symptoms to complicated forms which can lead to death. In particular, since the H7N9 influenza virus has been isolated in China in 2013, the H7 influenza virus continues to cause human deaths and deaths. In addition, the H7NX virus is likely to cause pandemic flu worldwide. Therefore, the main objective of this thesis are: (a) characterized H7 viruses isolated in South Korea and examine the pathogenic potentials; (b) investigate the mammalian factor of avian H7 viruses through ferret adaptation of the virus; (c) evaluate the immune response and cross-protective efficacy of Eurasian H7 avian influenza viruses. To identify the first objective: to detect the circulation of H7 avian influenza viruses, H7 viruses isolated in migratory birds and live poultry markets of South Korea from 2005 to 2014 was characterized. Phylogenic analysis revealed that while all viruses were clustered into the Eurasian-lineage of H7 avian viruses, at least 12 distinct genotypes were represented. Most H7 viruses contained at least one gene segment from the highly-pathogenic A/Sck/Hong Kong/YU100/02(H5N1)-like avian virus, and they could be separated into at least two antigenic groups. Although genetically identical strains were not detected, HI assay demonstrated close cross-reactivity of some isolates with the H7N9 viruses from China. Animal studies revealed that most of the genotypes could replicate in the lungs of mice and chickens without prior adaptation and some, particularly H7N4 and H7N7 subtypes, induced mortality in mice. During the mammalian host infections of avian influenza viruses, some H7 avian influenza viral genome might substitute to adapt to certain mammalian host. Second objective of this study was to investigate the mammalian adaption factor of avian H7 virus, A/Mallard duck/Korea/6L/07 (H7N6); wild type 6L (WT6L) which showed multi-organ infections in poultry, mouse and ferrets were serially passaged. Following 6 serial-passages in ferrets, the ferret adaptation 6L (FA6L) virus showed more than 1000 times increased virus titers in upper (6.45 log10EID50/mL) and lower (5.57 log10EID50/mL) respiratory specimens. Full-length sequences of all eight segments of FA6L revealed that segment specific substitutions were observed; PB2 (S286G, A684T), PB1 (F166L), PA (E319K, G631V), HA (A137S, E312K), NA (A145V), NP (T232I), and M (A227S) proteins. The affinity of the wild-type WT6L virus and the mammalian adaptive FA6L virus for avian and mammalian host receptors has been determined. The HA gene plays a crucial role in binding to host receptors, and the HA137S mutation in H7N6 was the affinity factor for mammalian receptors. Further, ferret infection study demonstrated that FA6L was detected from the nasal washes of two of three indirect-contact ferrets, and it suggested that the pathogenicity and transmissibility of FA6L virus was much greater than that of the parental WT6L virus. Animal transmission studies with recombinant FA6L viruses demonstrated that the simultaneous mutations on HA137S-312K and NA145V was a crucial role for ferret-to-ferret transmission in H7N6 viruses. These results highlight that minimal amino acid substitution on HA and NA genes of H7N6 virus could alter the ability to transmit into ferrets. As the third objective of this study, genetic relationships and cross-protective efficacies of three different Eurasian H7 avian influenza viruses were evaluated due to increasing concerns about human infection by various H7 influenza viruses, including recent H7N9 viruses. Phylogenic and molecular analyses revealed that recent Eurasian H7 viruses can be separated into two different lineages, with relatively high amino acid identities within groups (94.8 to 98.8%) and low amino acid identities between groups (90.3 to 92.6%). In vivo immunization with representatives of each group revealed that while group specific cross-reactivity was induced, cross-reactive hemagglutination inhibition (HI) titers were approximately 4-fold lower against heterologous group viruses than against homologous group viruses. Moreover, the group I (RgW109/06) vaccine protected 100% of immunized mice from various group I viruses, while only 20 to 40% of immunized mice survived lethal challenge with heterologous group II viruses and exhibited high viral titers in the lung. Moreover, while the group II (RgW478/14) vaccine also protected mice from lethal challenge with group II viruses, it failed to elicit cross-protection against group I viruses. However, it is noteworthy that vaccination with RgAnhui.1/13, a virus of a sublineage of group I, cross-protected immunized mice against lethal challenge with both group I and II viruses and significantly attenuated lung viral titers. Interestingly, immune sera from RgAnhui.1/13-vaccinated mice showed a broad neutralizing spectrum rather than the group-specific pattern observed with the other viruses. These results suggest that the recent human-infective H7N9 strain may be a candidate broad cross-protective vaccine for Eurasian H7 viruses. In conclusion, this study demonstrates the genetic characterization and potential pathogenicity of the H7-type influenza virus isolated in Korea for the pandemic H7-type influenza virus worldwide, the H7N6 strain of influenza viruses was used to identify mammalian adaptability and transmissibility with only a few gene reassortment. The efficacy of the H7 virus vaccine of Eurasian lineage were also evaluated suggesting that the H7N9 strain of influenza virus in China could be used as a vaccine candidate for a wide range of cross-protection vaccines against the H7 virus of the Eurasian lineage.

      • Development and Evaluation of Reverse Genetics-derived Highly Pathogenic Avian Influenza DIVA Vaccine : 역유전학 유래 야외주 감별 고병원성 조류인플루엔자 불활화 백신 개발 및 효능평가

        육성수 건국대학교 대학원 2017 국내박사

        RANK : 13880190

        고병원성 조류인플루엔자는 H5 그리고 H7 형 조류인플루엔자에 의한 바이러스성 질병이다. 고병원성조류인플루엔자는 경우에 따라 100% 폐사율을 보이기도 하며, 이는 가금 산업에 막대한 경제적 피해를 일으킨다. 일반적으로 고병원성 조류인플루엔자 발생을 통제하기 위해 차단 방역, 이동 제한, 살처분 조치를 취하고 있다. 그러나 이와 같은 차단 방역과 감염개체의 살처분에도 불구하고 질병의 전파를 막을 수 없는 경우에 가금류에 대한 백신으로 질병 발생을 통제 해왔다. 이와 함께 고병원성 조류인플루엔자 전파를 통제하기 위한 수단으로 비상 백신을 사전에 구축해놓는 것 또한 중요한 방역 수단의 하나이다. 본 연구의 주 목적은 닭과 오리에서 최근 유행하는 H5 형 고병원성 조류인플루엔자에 대한 방어 효능을 부여하는 백신을 개발하고 평가는 것이다. 본 논문 제 1장에서는 인플루엔자의 NA 단백질을 이용하여 백신개체로부터 야외주를 감별하는 백신을 제작하기 위해 자연계에 존재하는 H5와 NA 형의 조합을 조사하고, 가능한 NA 형을 선발하여 발현 백터에 삽입하였다. 최근 2010년과 2014년 발생했던 고병원성 조류인플루엔자 H5N1과 H5N8의 HA 유전자를 이용하여 두 개의 역유전학 유래 H5N9 인플루엔자를 고병원성 조류인플루엔자 백신 후보로 제작하였다. 이후, 특정 병원체 부재 계태아 종란 및 세포주에서 생성된 두 바이러스의 증식 특성을 조하였다. 또한 만일의 백신주 바이러스 노출에 대비하여 마우스와 닭에서 안전성을 평가하였다. 백신주로서 면역원성을 측정하기 위해 적혈구 응집억제 시험과 백혈구 증식 시험을 사용하여 닭에서 세포성, 체액성 면역반응을 평가하였다. 두 백신 주 바이러스의 계태아 종란에서 증식은 인체에서 이용되는 계절 독감 백신의 뼈대(backbone) 바이러스로 쓰이는 H1N1형 PR8 바이러스와 유사하였다. 마우스와 닭에서 병원성은 현재 저병원성 조류인플루엔자 백신 주로 사용되는 H9N2 바이러스와 동등하거나 낮은 수준이었다. 백신을 실시한 닭의 말초 림프구는 불활화 고병원성 조류인플루엔자 H5N1과 H5N8에 반응하였고, 혈청의 적혈구 응집억제 결과는 OIE의 고병원성 조류인플루엔자 백신 권장 역가를 충족하였다. 제 2장에서는 국내 야생조류에서 분리 한 H5N1, H5N8, H5N6 고병원성 조류인플루엔자에 대해 실제 방어 효능을 측정하였다. 또한, 두 백신의 다른 계통(clade) 바이러스에 대한 체액성 면역 반응을 측정하기 위해 동종 또는 이종의 항원을 이용한 적혈구 응집억제 반응을 닭과 오리에서 실시하였다. 두 백신은 동종 또는 이종의 H5N1, H5N8, H5N6 고병원성 조류인플루엔자 감염에 닭과 오리에서 모두 100% 생존 방어를 부여하였으며, 감염 바이러스의 배출을 측정 할 수 없는 수준으로 줄였다. 적혈구 응집억제 반응 결과 백신의 닭에서 면역원성 부여는 OIE 백신 권장 수준을 충족하였다. 그러나 먼 계통의 항원을 이용한 교차 적혈구 응집억제 반응 역가는 닭에서 방어 효능을 부여 할 수준에 다다르지 못하였다. 한편, 오리에서 적혈구 응집억제 반응 역가 결과는 OIE 백신 권장 수준을 충족하지 못하였다. 이는 오리에서 방어효능과 혈구 응집억제 역가 간의 상관관계에 대한 추가 연구가 필요할 것을 시사했다. 한편, 야외주 감염에 대한 마이크로 뉴라미니다아제 억제 시험으로 백신 후 감염 계군을 성공적으로 구별하여, 계군 수준의 감별을 실험실적으로 증명하였다. 제 3장에서는 오리에서 방어 가능한 면역 반응을 유도하면서도 체중 손실을 최소화하기 위한 백신 사용법을 찾기 위해 백신의 항원 용량, 어주번트 사용, 백신 주령을 조사하였다. 일 일령 오리에서 단회 백신은 적절한 면역반응을 유도하지 못하였다. 일 일령과 이 주령 오리에서 오일 어주번트를 이용한 H5N9 백신은 젤 어주번트를 이용한 H5N9 백신에 비해 도축 주령인 7주령에서 체중 손실을 일으켰다. 그러나 젤 어주번트를 이용한 백신은 적절한 면역반응을 일으키지 못하였고, 오일 어주번트를 이용한 추가 백신이 필요했다. 종합 해 볼 때 도축시기에 체중 손실 없이 면역 반응을 일으키는 백신 전략은 일 일령에 젤 어주번트를 이용하고 4주령에 오일 어주번트를 이용한 백신이었다. 또한 오리에서 백신 항원 용량을 낮추기 위해 CpG-ODN을 이용하였고, 중등도의 항원 용량을 이용을 이용하면서도 유의하게 적혈구 응집반응 억제 항체 역가를 상승시켰다. 결론적으로, 이 연구를 통해 최적화된 젤-오일 어주번트 전략, 최적의 항원 농도, CpG-ODN 첨가는 불활화 H5N9 고병원성 조류인플루엔자 백신의 야외적용 시험에서 면역반응 및 체중 증대 최대화에 중요한 정보가 될 것이다. Highly pathogenic avian influenza (HPAI) is a viral disease caused by H5 and H7 subtype avian influenza virus (AIV). HPAI causes great economic losses to poultry industry with almost 100% mortality and poses great challenges to public health. To control HPAI outbreak, several strategies have been applied including bio-security measures, movement control, and stamping-out. However, despite efforts to cull infected poultry and introduce biosecurity measures, when diseases are enzootic and/or bio-security measures are impractical to enforce, vaccination has become an important part of control programs for the HPAI enzootic countries. Together, preparing and stockpiling emergency vaccines to constrain and eliminate HPAI viruses is one of the important quarantine measures for the HPAI epizootic countries. Therefore, the major goal of this study is to develop and assess the HPAI vaccine which provide the chickens and ducks with protection against currently circulating H5 HPAI. In chapter 1, possible reassortment between H5 and NA subtype, which has existed by natural recombination, was searched and possible N9 subtypes were cloned for constructing expression vector in order to generate vaccine strains for differentiating infected from vaccinated animal (DIVA) using neuraminidase (NA) protein. Two reverse genetics-derived H5N9 subtype influenza virus were generated using hemagglutinin (HA) gene of H5N1 and H5N8 HPAI virus as a candidate of HPAI vaccine. Subsequently, the viral growth characteristics were measured in SPF-ECEs and cell lines. In case of possible contamination, the safety was evaluated using mice and chickens. The cellular and humoral immune responses in chickens were assessed using hemagglutination inhibition (HI) assay and lymphocyte proliferation assay. The viral growth properties of both two vaccine candidates were comparable to those of H1N1 subtype PR8 virus which has been used as a back-bone virus for human seasonal influenza vaccine due to its high growth in SPF-ECEs. The pathogenicity of two vaccine candidates in mice and chickens was equivalent to or lower than that of H9N2 LPAI vaccine strain currently in use. Peripheral lymphocytes of vaccinated chickens were reactive to stimuli of inactivated H5N1 and H5N8 HPAI antigen and mean serum HI titer fulfilled the OIE standard to an extent for alleviating viral shedding. In chapter 2, actual protective efficacy was determined against H5N1, H5N8, and H5N6 HPAI viruses isolated from wild birds during the migration seasons (2010, 2015, and 2016) in South Korea. In addition, heterologous HI tests were performed to estimate humoral immune responses against genetically distinct clade HPAI in both chickens and ducks. The vaccines conferred 100% survival protection against the homologous H5N1, H5N8, and H5N6 HPAI virus with significant viral shedding reduction to an undetectable level. The HI assay results indicated that the chickens was successfully immunized as recommended in OIE manual. However, heterologous HI titer against distinct clade HPAI did not reach to the protective level in chickens. Meanwhile, all the HI titer in ducks did not reach the OIE recommendation even against homologous antigen. This results suggested that further studies are needed to find correlation between HI titers with protective efficacy in ducks. The microneuraminidase inhibition test was successfully applied to differentiate the vaccinated-infected birds from vaccinated birds, suggesting that the test used in this study might comply with the DIVA strategy under flock basis concept. In chapter 3, antigen dose, adjuvant usage and timing of vaccination, which induce protective immune responses without body weight loss, were investigated to better understand the optimal usage of H5N9 vaccine in ducks. Single vaccination in day-old ducks was inadequate to induce protective HI titer even in the highest antigen dose. Meanwhile, oil-adjuvanted H5N9 vaccination in day-old and 2-week-old ducks decreased the body weight at the time of slaughtering compared to that of gel-adjuvanted H5N9 vaccine. On the contrary, gel-adjuvanted H5N9 vaccine failed to induce proper immune response, which required oil-adjuvanted boost vaccination. Taken together, the optimum vaccine strategy without body weight loss was prime vaccination with gel adjuvant and boost vaccination with oil adjuvant regimen. In addition, use of CpG-ODN could significantly increase HI antibody titer even in moderate antigen dose, which might save the antigen dose in practical use of H5N9 vaccine in domestic ducks. In conclusion, the gel prime-oil boost regimen, antigen dose and CpG-ODN supplement set in this study would be valuable information to maximize immune response and body weight gain in continuing the field application study.

      • 언론보도가 조류사육업자의 조류인플루엔자 신고의도에 미치는 영향

        윤명희 圓光大學校 2009 국내박사

        RANK : 13880190

        배경 : 이 연구에서는 조류인플루엔자에 대한 가금류 사육업자의 신고의지에 따른 지식수준, 인지도, 심각성 인식 및 언론보도에 의한 영향 등을 파악함으로써 조기감시 및 방역 등에서 중요한 대상인 가금류 사육업자의 적극적 참여를 유도할 수 있는 전략의 기초를 제시하고자 하였다. 방법 : 연구는 신고의지군 38명, 신고비의지군 17명 등 가금류 사육업자 55명을 대상으로 실시하였다. 대상자는 ‘08년도 조류독감 유행지역에서 선정하였다. 조사기간은 2008년 7월부터 9월까지 3개월이었다. 설문내용은 대상자의 일반 특성, 조류인플루엔자에 대한 주관적 지식 및 인지 수준, 언론보도에 대한 영향 및 신뢰수준 등으로 구성하였다. 결과 : 사육업자들의 조류인플루엔자에 대한 교육이수율은 27.3%로 낮았으나 교육필요성 인지는 89.1%로 나타났다. 또한 조류인플루엔자에 대한 정보는 대부분(80.0%) 언론보도를 통해 습득하고 있었다. 언론보도가 자신과 다른 사람에게 미치는 영향에 대한 ‘제3자 효과’는 신고비의지군(41.2%)에서 신고의지군(10.5%)보다 높게 나타났으며(p<0.05) 조류인플루엔자와 관련된 언론보도에 대한 신뢰수준은 신고비의지군에서 신고의지군보다 낮게 나타났다(p<0.05). 신고의지가 없는 사람들에서 신고하지 않겠다는 이유로는 ‘신고 시 감수해야 하는 경제적 손실에 대한 우려’가 64.7%로서 가장 많았다. 또한 ‘언론보도에 대한 신뢰도’는 ‘제3자 효과’와 음(negative)의 상관성이 있는 것으로 나타났다(p<0.05). 조류인플루엔자에 대한 언론보도의 신뢰도가 감소할수록 제3자 효과는 증가하는 것으로 나타났다(p<0.05). 결론 : 조류인플루엔자와 관련된 질병관리 문제들을 해결하기 위해서는 가금류 사육업자의 조류인플루엔자에 대한 올바른 인식 및 지식의 습득뿐만 아니라 언론보도의 내용이나 방향성에서 정확한 정보 제공과 더불어 사육업자의 심리 및 감성을 고려하여 신뢰성 회복에 주안점을 두어야 할 것으로 사료된다. Objectives: Active participation of poultry breeder in surveillance system of Avian Influenza (AI) is very important. Therefore this study was conducted to present basic data for active report about AI of poultry breeder that is affected by media's coverage. Methods: Fifty five poultry breeders participated in the study, who were classified into two groups; intention to report group (38) and non-intention to report group (17). Data were collected by the trained investigator from Jul. 1 to Sep. 31, 2008. Respondents were interviewed by means of a structured questionnaire. Results: In poultry breeder, prevalence of education and requirement of education about AI were 27.3% and 89.1%, respectively. Of the poultry breeder who get the information source on the AI, 80.0% were media. But these factors did not show the difference between two groups. The third-person effect among perceptions of influence in media's report on the AI was higher in non-intention to report group (41.2%) than in intention to report group (10.5%). However, Confidence to media report on the AI was lower in non-intention to report group than in intention to report group. The cause of avoidance of report was 'economic damage' for 64.7%, which acocounted for the majority of cases. Confidence to media report on the AI were negatively correlated with the third-person effect. Conclusion: These results showed that intention to report of the AI of breeder was susceptible to influenced by the third person effect and confidence in media's report on the AI. Therefore author should give a special attention to increase active report of poultry breeder during epidemic period of AI which is consideration of reasonable strategy of media's coverage, including mind and emotion state of poultry breeder.

      • 가금류 사육업자에서 조류인플루엔자에 대한 주기적 교육 및 홍보의 필요성

        김형민 圓光大學校 2012 국내박사

        RANK : 13880189

        배경 : 이 연구에서는 조류인플루엔자에 대한 가금류 사육업자의 유행과 비유행시의 신고의지에 영향을 미치는 관련 요인들의 특성을 파악함으로써 조류인플루엔자 발생 시 조기 신고율 향상을 위한 상시적인 교육 및 홍보의 필요성에 대한 근거를 제시하고자 하였다. 방법 : 가금류 사육업자(이하 사육업자)는 2008년도에 조류인플루엔자가 유행한 지역에서 가금류 사육에 직접 종사하는 사람으로서 유행시(2008년) 34명과 비유행시(2010년) 32명으로 구성되었다. 설문조사는 연구자로부터 전문교육을 받은 조사원에 의해 직접면접의 형태로 수행되었다. 조사기간은 2008년 7월과 2010년 9월 각각 1개월이었다. 설문내용은 대상자의 일반 특성, 조류인플루엔자에 대한 주관적 지식 및 인지 수준, 교육경험, 교육 필요성, 신고의지, 신고기피 이유 등으로 구성되었다. 결과 : 조류인플루엔자에 대한 지식 수준은 유행시기 3.18에서 비유행시기 2.80으로 감소하였다(p>0.05). 조류인플루엔자에 대한 중요성 및 심각성에 대한 인식은 비유행시기에 현저하게 감소하는 것으로 나타났다(p<0.05). 조류인플루엔자에 대한 정보습득은 두 시기 모두 주로 텔레비전을 통해 이루어지는 것으로 나타났으나, 보건소가 차지하는 비중은 비유행시기에 현저히 증가한 것으로 나타났다(p<0.05). 한편 조류인플루엔자와 관련된 언론보도에 대한 신뢰수준은 비유행시기에 상대적으로 감소하는 것으로 나타났다(p<0.05). 조류인플루엔자 관련 교육 이수는 유행과 무관하게 낮은 수준을 나타내었으며 교육의 필요성에 대한 인지 수준은 비유행시기에 감소하는 것으로 나타났다(p<0.05). 조류인플루엔자 관련 홍보에 대한 노출 수준은 유행시기 88.2%에서 비유행시기 35.5%로서 현저하게 감소하였다(p<0.05) 조류인플루엔자 유행을 인지한 경우 신고의지는 유행시기 76.5%, 비유행시기 73.3%로서 두 시기 80% 이하로 나타났다. 신고의지가 없는 사람들에서 신고하지 않겠다는 이유로는 유행시기는 ‘신고 시 감수해야 하는 경제적 손실에 대한 우려’가 100.0%로 나타났으나, 비유행시기는 경제적 손실에 대한 우려는 50.0%로서 현저히 감소하였고, 신고방법을 잘 모르는 경우가 37.5%로서 높게 나타났다(p<0.05). 결론 : 가금류 사육업자들에 대한 조류인플루엔자 관련 교육과 홍보는 유행과 관련없이 지속적·주기적으로 이뤄져야 한다. 특히 내용면에서는 조류인플루엔자 발생 시 신고방법, 조기인지의 중요성, 유행 시 경제적 피해에 대한 불안감 해소 등에 대한 고려가 필요함을 제시해 주고 있다. 또한 교육 및 홍보 주체는 언론매체에 대한 가금류 사육업자들의 신뢰 수준을 고려할 때 보건소 및 축산관련 기관의 유기적 협조를 통해 일정부분 담당해야 할 필요가 있다. 한편 가금류 사육업자들은 비유행시기에도 유행시기와 마찬가지로 여전히 조류인플루엔자에 대한 정보 습득을 언론매체에 크게 의존하는 경향이 있으므로 언론을 통한 신뢰성 있는 지속적인 정보제공도 고려해야 할 것이다. Objective: This study was conducted to present basis data for active report of AI that is affected by media's coverage in poultry breeder. Methods: Subjects were 66 persons, 34 who were poultry breeder at epidemic area of AI and 32 who were general person at non-epidemic area. Data were collected by the trained investigator from Jul. 1 to Aug. 31, 2008 and from Sep. 1 to Oct. 31, 2010. Respondents were interviewed by means of a structured questionnaire. Results: The Awareness of the AI, subjective knowledge on the AI, and perception on importance and seriousness of the AI were higher in epidemic period than in non-epidemic period. Poultry breeder in epidemic period gained their information regarding AI from television(61.8%) and public health center(5.9%). On the one hand, poultry breeder in epidemic period gained their information regarding AI from television(56.3%) and public health center(21.9%). The perceptions of influence in media report on the A.I was higher in epidemic period than in non-epidemic period. In addition to this, Confidence to media report on the A.I was higher in epidemic period than in non-epidemic period. The educational experience on AI was higher than in the in non-epidemic period, but the differences was not statistically significant. Answered rate of need for education and exposure rate of public relations on AI in epidemic period were higher than those in non-epidemic period. Intention, report of the AI was 76.5% in epidemic period respectively, was 73.3% in non-epidemic period. The major cause of avoidance of report in epidemic period was 'economic damage'. But, the causes of avoidance of report in non-epidemic period were 'economic damage'(50.0%), ‘don’t know process of report’(37.5%), and ‘annoying’(12.5%). Conclusions: These results showed that intention to report of the AI of poultry breeder was susceptible to influenced by education and public relations. Therefore, i should give a special attention to increase active report of poultry breeder during epidemic and non-epidemic period of AI which is consideration of reasonable strategy of continuous education and public relations providing. Keywords : Avian Influenza, Active Report. Education, Public Relations.

      • 2016/2017년 국내에서 발생한 Clade 2.3.4.4 H5N6 고병원성 조류 인플루엔자의 세 가지 품종 닭에서 병원성 분석

        박석찬 전북대학교 일반대학원 2019 국내석사

        RANK : 13880189

        2016년 새로운 H5N6 고병원성 조류인플루엔자가 한국에서 발생하였다. 이 발생기간 동안 지금껏 한국에서 고병원성 조류인플루엔자로 인해 발생한 피해 중 가장 큰 경제적 피해와 많은 수의 살처분이 발생하였다. 이번 살처분의 특징 중 하나로 갈색계에서 집중된 발생을 보였다. 따라서 우리는 흰색계인 SPF 닭, 육계 그리고 갈색계인 한국토종닭을 사용하여 이 바이러스의 병원성과 전파력을 확인하였다. 그 결과 갈색계인 한국토종닭에서 흰색계보다 약간 더 긴 평균치사시간과 바이러스 전파를 보였다. 고병원성 조류인플루엔자의 전파에는 농장간의 차단방역 정도의 차이, 알 수거 차량의 출입 빈도 등 여러 가지 전파 요인이 있으나 우리의 실험 결과를 통해 한국토종닭에서의 이러한 특성이 농장간 전파에 영향을 주었을 수도 있음을 확인하였다.

      • Surveillance and genetic evolution of H5 avian influenza viruses from migratory birds in South Korea during 2014-2017

        Hiep Dinh Nguyen 충북대학교 2017 국내석사

        RANK : 13880188

        Under the emergence of novel H5Nx viruses in the East Asia Flyway, to understand the genetic evaluation of recent avian influenza viruses (AIVs) in South Korea, we investigated AIV gene pools of migratory wild birds collected from four consecutive winter seasons (2013/2014 to 2016/2017). During this study, we collected 2496 specimens wherein total of 153 AIVs were isolated. Genetic characterization of AIVs showed that 110 (71.89%) and 43 (28.11%) were identified as low-pathogenic (LP) and high-pathogenic (HP) AIVs, respectively. Of the 110 LPAI viruses we isolated, all subtypes of Influenza viruses from H1 to H12, except H2 and H9 were detected. Specifically, the proportion of H7 AIVs isolates were 22.3% in total of LPAI AIVs isolates positive samples. Among these LPAI subtypes, the H7N7 subtype was the most common (N=34), followed by H4N6 (N=14) and H5N3 (N=11). In addition, H1N1 and H11N9 subtypes were commonly detected from migratory birds with the same number of virus (N=10). Of the HPAI viruses, the H5N8 subtype (N=36) was the most frequent virus isolated from 2014/2015 and 2016/2017 winter season though their genetic constellations vary with each other. Moreover, the H5N6 (N=6) and H5N7 (N=1) viruses were only isolated in 2016/2017 winter season. Full length phylogenetic analyses of the HPAI H5 viruses revealed that the genetic origins of HPAI H5N8 and H5N6 viruses were different and they can be further separated into at least five and three genotypes of H5N6 and H5N8 viruses, respectively, by reassortments between recent HPAI H5Nx and LPAI viruses which co-circulating in South Korea. Taken together, our results provide evidences that active genetic reassortments of AIVs occurred within wild migratory bird flocks and LPAIVs are likely to have played an important role in the evolution of novel reassortant H5Nx HPAIVs in the East Asia Flyway. 동아시아의 철새 이동경로에서 새로운 조류 인플루엔자 바이러스 (H5Nx)의 출현으로 국내의 최근 조류 인플루엔자 바이러스 (AIVs)에 대한 유전적 진화를 분석하기 위해 네 번의 겨울철 (2013/2014년에서 2016/2017까지)에 수집한 야생 조류에서 분리된 조류 인플루엔자 바이러스의 유전자형을 조사하였다. 이 연구 동안 총 2496 개의 표본을 채취하여 총 153 개의 조류 인플루엔자 바이러스가 분리되었다. 조류 인플루엔자 바이러스의 유전적 특성에 따라 저 병원성 (LP) 및 고 병원성 (HP) 조류 인플루엔자로 각각 110 개 (71.89 %)와 43 개(28.11 %)가 확인되었다. 분리된 110 종의 저 병원성 조류 인플루엔자 바이러스 중 H2형과 H9형을 제외한 H1형에서 H12형까지 모든 아형이 검출되었다. 구체적으로, H7형 조류 인플루엔자의 비율은 저 병원성 조류인플루엔자의 양성 샘플에서 22.3 %였다. 이들 저 병원성 조류 인플루엔자 아형 중에서 H7N7 아형이 가장 많았으며 (N=34), H4N6 아형 (N= 14), H5N3 아형 (N=11) 순이었다. 또한 H1N1 및 H11N9 아형은 동일한 수의 바이러스 (N=10)가 철새에서 발견되었다. 고 병원성 조류 인플루엔자 바이러스 중 H5N8 아형 (N=36)은 2014/2015 및 2016/2017년도 겨울시기에 가장 빈번하게 분리된 바이러스였지만 그들의 유전적 배열은 서로 다르게 나타났다. 또한 H5N6 (N=6) 및 H5N7 (N=1) 아형의 바이러스는 2016/2017년도 겨울철에만 분리가 되었다. 고 병원성의 H5 바이러스의 전장 계통 분석 결과, HPAI H5N8과 H5N6 바이러스의 유전적 기원 다른 것으로 확인되었으며, 최근 HPAI H5Nx와 같이 순환하던 저 병원성의 조류 인플루엔자 바이러스 사이의 재조합에 의해 각각 5개의 H5N6과 3개의 H5N8 바이러스 유전형이 존재하는 것을 확인 할 수 있었다. 결론적으로, 나의 연구 결과는 HPAIVs의 활발한 유전 재조합이 야생 철새 무리에서 발생하고 있으며, LPAIV가 동아시아 비행 경로의 새로운 재조합 H5Nx HPAIV의 진화에 중요한 역할을 하고 있음을 보여 준다.

      • Evaluation of inactivated vaccine and live recombinant Newcastle Disease Virus-vectored vaccine against Highly Pathogenic Avian Influenza Virus in ducks

        이지호 건국대학교 대학원 2022 국내박사

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        H5 subtype 고병원성 조류인플루엔자바이러스는 매 2~3년 주기로 철새를 통해 한국으로 유입되어 양계 산업에 막대한 피해를 입혀왔다. 중국에서 A/goose/Guangdong/1996 (Gs/GD) 계통 H5N1 고병원성 바이러스가 출현한 이후, 이 바이러스는 clade 0-9에 해당하는 10가지 clade로 분화하였다. 특히 clade 2 H5 subtype의 고병원성 조류인플루엔자바이러스는 clade 2.1, clade 2.3.4, clade 2.3.4.4로 분화되었다. Clade 2.3.4.4 H5 바이러스들은 많은 나라에 전파가 되었고 양계 산업에 막대한 피해를 입혔다. 비록 철새가 대륙간의 고병원성 조류인플루엔자바이러스 전파에 주요 원인으로 알려져 있지만 집오리 또한 건강한 보균체로 역할을 하며 바이러스 전파의 주요 원인이 되고 있다. 오리 류는 고병원성 조류인플루엔자바이러스에 취약하지만 병원성이 낮아 바이러스를 다른 종에 전파시키는 “트로이 목마”와 같은 역할을 한다. 한국에서 2017-2018 겨울 시즌에는 고병원성 조류인플루엔자 양성 농가 18개 중 무려 13개의 농가가 오리 농장이었다. 현재 한국에서는 고병원성 조류인플루엔자에 대한 백신이 허용되고 있지 않다. 바이러스에 감염된 조류에 대한 살처분이 고병원성 조류인플루엔자에 대한 대책으로 실시되고 있다. 하지만 이런 방법들은 막대한 노동력을 요구하며 농장에서 농장으로 바이러스가 활발히 전파가 되고 있을 때는 적용을 하기 어렵다. 따라서 고병원성 조류인플루엔자가 발생하기에 앞서 미리 오리에 대한 백신이 적용되어야 한다. 본 연구에서 재조합 뉴캣슬병 바이러스를 사용하여 고병원성 조류인플루엔자 벡터백신을 개발하였고 불활화 고병원성 조류인플루엔자 백신과 효능을 비교하였다. 제 1장에서는 오리에 대한 A/duck/Korea/ES2/16 (ES2) 바이러스의 병원성을 확인하였고 5주령 오리에서의 불활화 오일 백신 효능을 평가하였다. ES2 고병원성 조류인플루엔자 바이러스의 BID50는 104.0EID50 이하로 측정되었고 BLD50는 104.47 EID50로 측정되었다. 폐사한 오리에서 췌장에서의 괴사와 복수가 관찰되었다. 불활화 백신의 평가 시험에선 백신 1 투여량, 1/10 투여량, 1/100 투여량을 2주령 오리에게 적용하였다. 항체 혈구응집 억제(HI) 역가는 백신 투여량에 비례하여 증가하였고 1/10 투여량 및 1/100 투여량을 투여한 오리는 양성 대조군에 비하여 바이러스 배출량이 적었지만 1 투여량을 접종한 오리보다 배출량이 높은 것을 확인할 수 있었다. 제 2장에서는 내열성과 안전성이 입증된 K148/08 뉴캣슬병 바이러스를 활용한 뉴캣슬병 바이러스 벡터 백신 플랫폼을 구성하였다. K148/08 벡터 백신 플랫폼을 성공적으로 수립한 이후에 ES2 고병원성 조류인플루엔자 바이러스의 HA 유전자를 K148/08 바이러스 전장 유전자가 들어간 플라스미드의 P와 M 유전자 열린 해독틀 (Open Reading Frame) 사이에 삽입하였다. Hep-2 cell에 transfection 이후 ES2 바이러스의 HA 단백질을 발현하는 재조합 K148/08 바이러스(rK148/ES2-HA)가 성공적으로 rescue 되었고 ES2 바이러스 HA 단백질 발현이 웨스턴블롯분석을 통해 확인되었다. 제 3장에서 재조합 생독 K148/08 NDV 바이러스, 이름하여, rK148/ES2-HA를 1일령 오리에 스프레이 또는 안비(眼鼻, Oculonasal) 접종법을 통해 접종하였다. rK148/ES2-HA를 오리에 안비 접종하였을 때 고병원성 조류인플루엔자 바이러스에 대한 항체가는 1주차부터 유도되기 시작한 반면에 스프레이로 백신을 한 오리에서는 부스터 백신 이후에 고병원성 조류인플루엔자바이러스에 대한 항체가 유도되기 시작하였다. 또한 재조합 뉴캣슬 백신은 모체로부터 받은 것으로 예상되는 뉴캣슬병 바이러스에 대한 기존 항체를 극복하고 면역능을 나타냈다. rK148/ES2-HA로 백신을 한 오리에서 공격접종 후에 높은 생존률을 보여주었고 낮은 바이러스 배출을 보여주었다. 종합하면, rK148/ES2-HA 백신은 치사감염으로부터 오리를 방어하고 바이러스 배출을 낮아지게 하였다. 결론으로 이 연구에서 개발된 rK148/ES2-HA 백신은 고병원성 조류인플루엔자 바이러스 불활화 백신과 비교하였을 때 상당한 방어능과 바이러스 전파 억제를 보여주었다. 스프레이 백신을 통한 손쉬운 방법과 빠른 면역능 형성을 통해 rK148/ES2-HA 백신은 H5 고병원성 조류인플루엔자 발생시 바이러스의 전파를 억제할 것으로 기대된다. The H5 subtype highly pathogenic avian influenza virus (HPAIV) have been introduced to South Korea every two or three years via wild migratory waterfowls, causing devastating damages to the poultry industry. Since the emergence of the A/goose/Guangdong/1996 (Gs/GD) lineage H5N1 HPAIV in China, this virus subsequently evolved into 10 clades, from clade 0-9. Especially, the clade 2 H5 subtype of HPAIV expanded into clade 2.1, clade 2.3.4 and clade 2.3.4.4. The clade 2.3.4.4 H5 viruses were introduced to many countries and caused devastating damage in poultry industry. Although migratory waterfowls are known as the main cause of the intercontinental spread of HPAIV, domestic ducks also act as healthy reservoirs and contribute to the spread of the virus. Duck species are susceptible to HPAIV but show low pathogenicity and act as “Trojan horses” to spread HPAIV to other species. In 2017 and 2018 winter season of South Korea, 13 out of 18 HPAIV positive farms were duck farms. Currently, the vaccination against HPAIV is not allowed in south Korea. The culling and stamping of infected birds are current measures against the spread of HPAIV. However, these methods are labor-intensive and difficult to apply when the outbreak is ongoing from farm to farm. Therefore, vaccination in ducks should be prepared ahead of the outbreak of HPAIV. Most of HPAIV vaccines used in domestic ducks are oil-emulsion-inactivated vaccines and these vaccines require labor-intensive administration methods to provide sufficient herd immunity. In this study, I developed recombinant Newcastle disease virus vectored HPAIV vaccine and compared their efficacy with that of inactivated HPAIV vaccine. In chapter 1, the pathogenicity of A/duck/Korea/ES2/16 (ES2) in ducks and the efficacy of inactivated oil vaccine to 5 weeks old ducks were evaluated. The ES2 HPAIV showed BID50 of less than 104.0EID50 and BLD50 of 104.47EID50. Necrosis in pancreas and ascites in abdominal cavity were observed in dead ducks. In the evaluation study of inactivated vaccines, 1 dose, 1/10 dose and 1/100 dose of vaccines were administrated to 2 weeks old domestic ducks. The antibody hemagglutination inhibition(HI) titers were proportional to the dose of the vaccine. Ducks administrated with 1/10 dose and 1/100 dose showed lower viral shedding when compared to ducks in mock vaccinated group but higher than ducks administrated with 1 dose of the vaccine. In chapter 2, Newcastle disease virus vector vaccine platform was constructed using K148/08 NDV strain that had previously shown thermostability and safety. After successful establishment of the K148/08 vector vaccine platform, the HA gene of the ES2 HPAIV was inserted between open reading frame of P and M gene of the K148/08 full genome plasmid. The recombinant K148/08 virus expressing ES2 HA (rK148/ES2-HA) was successfully rescued after the transfection in Hep-2 cell. The expression of ES2 HA was verified by westernblot analysis. In chapter 3, a live recombinant K148/08 NDV virus, namely, rK148/ES2-HA was administrated to 1-day old ducklings by spray or oculonasal route. The oculonasal inoculation of the rK148/ES2-HA in ducks elicited antibody titers against HPAIV as early as 1 week after the single dose of vaccination, whereas spray vaccination in ducks elicited antibodies against HPAIV after the booster vaccination at 3 weeks post priming vaccination. Furthermore, vaccination in ducks tolerated pre-existing antibodies against NDV, which were presumably derived from breeder ducks. The ducks vaccinated with rK148/ES2-HA showed high survival rates and low viral shedding after H5N6 HPAIV challenge. Collectively, vaccination with rK148/ES2-HA prevented lethal infection and decreased viral shedding in ducks. Taken together, these studies indicated that the viral shedding and mortality caused by H5N6 HPAIV infection in ducks may be prevented by oil-emulsifed inactivated vaccine and viral vectored vaccine. The rK148/ES2-HA vaccine developed in this study could be useful in protecting and suppressing viral transmission in H5 HPAIV outbreaks, with the ease of vaccine application and fast onset of immunity.

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